Buccal Swab/FTA කාඩ් DNA හුදකලා කට්ටලය Genomic DNA නිස්සාරණය හෝ Buccal Swabs වෙතින් පිරිසිදු කිරීමේ කට්ටලය
කට්ටල විස්තරය:
බුකල් ස්පුබ්/එෆ්ටීඒ කාඩ් සාම්පලවලින් උසස් තත්ත්වයේ ජානමය DNA ඉක්මනින් පිරිසිදු කරන්න.
◮RNase දූෂණය නැත:කට්ටලය මඟින් සපයන DNA-පමණක් තීරුව මඟින් පර්යේෂණයේදී RNase එකතු නොකර ප්‍රවේණි DNA වලින් RNA ඉවත් කිරීමට හැකි වන අතර, බාහිර RNase මගින් රසායනාගාරය දූෂිත වීම වළක්වයි.
◮වේගවත් වේගය:Foregene Protease සමාන protease වලට වඩා ඉහළ ක්‍රියාකාරිත්වයක් ඇති අතර පටක සාම්පල ඉක්මනින් ජීර්ණය කරයි;මෙහෙයුම සරල වන අතර, ජානමය DNA නිස්සාරණය කිරීමේ මෙහෙයුම විනාඩි 20-80ක් ඇතුළත අවසන් කළ හැක.
◮පහසු:කේන්ද්රාපසාරී කිරීම කාමර උෂ්ණත්වයේ දී සිදු කෙරෙන අතර, 4°C අඩු උෂ්ණත්ව කේන්ද්රාපසාරී හෝ DNA වල එතනෝල් වර්ෂාපතනයක් අවශ්ය නොවේ.
◮ආරක්ෂාව:කාබනික ප්රතික්රියාකාරක නිස්සාරණය අවශ්ය නොවේ.
◮ඉහළ ගුණත්වය:නිස්සාරණය කරන ලද ප්‍රවේණික DNA වල විශාල කොටස් ඇත, RNA නැත, RNase නැත, සහ විවිධ අත්හදා බැලීම්වල අවශ්‍යතා සපුරාලිය හැකි අතිශයින් අඩු අයන අන්තර්ගතයක් ඇත.
◮ක්ෂුද්‍ර එලියුෂන් පද්ධතිය:එය ප්‍රවේණි DNA සාන්ද්‍රණය වැඩි කළ හැකි අතර, එය පහළට හඳුනා ගැනීමට හෝ අත්හදා බැලීමට පහසු වේ.
විස්තර
මෙම කට්ටලය බුකල් ස්පුබ් සහ FTA කාඩ්පතෙන් (රුධිර පැල්ලම්) ඉහළ සාන්ද්‍රණයකින් යුත් ජානමය DNA ලබා ගැනීමට කාර්යක්ෂම හා වේගවත් ක්‍රමයක් සපයයි.අපගේ සමාගම භාවිතා කිරීම'ගේ අද්විතීය DNA-පමණක් සිලිකා පටල භ්‍රමණය තීරුව සහ සූත්‍රය, Foregene Protease සමඟ ඒකාබද්ධව, ඉහළ සාන්ද්‍රණය, උසස් තත්ත්වයේ ජානමය DNA විනාඩි 80කින් නිස්සාරණය කළ හැක.විශේෂයෙන් නිර්මාණය කරන ලද කුඩා පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව ජානමය DNA බන්ධනය කරන අතර DNA කුඩා ප්‍රමාණයකින් ඉවත් කළ හැක (15μl) ලබාගත් ප්‍රවේණික DNA සාන්ද්‍රණය වැඩි කිරීම සඳහා ඉවත් කිරීමේ පද්ධතිය, එය පහළට හඳුනාගැනීම හෝ අත්හදා බැලීම සඳහා පහසු වේ.කට්ටලයට වරකට සාම්පල එකක් හෝ කිහිපයක් සැකසීමට හැකි අතර, පිරිසිදු කිරීමේ ක්‍රියාවලියට ෆීනෝල්, ක්ලෝරෝෆෝම් වැනි කාබනික ද්‍රව්‍ය නිස්සාරණය කිරීම සහ කාලය ගත කරන අයිසොප්‍රොපැනෝල් හෝ එතනෝල් වර්ෂාපතනය අවශ්ය නොවන අතර මෙහෙයුම සරල හා කාලය ඉතිරි කරයි.
පිරිවිතර
50 සූදානම්
කට්ටල සංරචක
| බෆරය ST1 |
| බෆරය ST2 |
| රේඛීය ඇක්රිලමයිඩ් |
| බෆර් PW |
| බෆර් WB |
| බෆර් EB |
| Foregene Protease |
| DNA-පමණක් තීරුව |
| උපදෙස් |
විශේෂාංග සහ වාසි
-RNase දූෂණය නැත: කට්ටලය මඟින් සපයන DNA-පමණක් තීරුව මඟින් පර්යේෂණය අතරතුර RNase එකතු නොකර ප්‍රවේණික DNA වලින් RNA ඉවත් කිරීමට හැකි වන අතර, බාහිර RNase මගින් රසායනාගාරය දූෂිත වීම වළක්වයි.
- වේගවත් වේගය: Foregene Protease සමාන ප්‍රෝටීස් වලට වඩා ඉහළ ක්‍රියාකාරකම් ඇත, සාම්පල ඉක්මනින් දිරවයි;සරල මෙහෙයුම.
පහසු: කේන්ද්රාපසාරී කිරීම කාමර උෂ්ණත්වයේ දී සිදු කරනු ලබන අතර, DNA වල 4°C අඩු-උෂ්ණත්ව කේන්ද්රාපසාරී හෝ එතනෝල් වර්ෂාපතනයක් අවශ්ය නොවේ.
-ආරක්ෂාව: කාබනික ප්රතික්රියාකාරක නිස්සාරණය අවශ්ය නොවේ.
-ඉහළ ගුණත්වය: නිස්සාරණය කරන ලද ප්‍රවේණික DNA වල විශාල කොටස් ඇත, RNA නැත, RNase නැත, සහ විවිධ අත්හදා බැලීම්වල අවශ්‍යතා සපුරාලිය හැකි අතිශයින් අඩු අයන අන්තර්ගතයක් ඇත.
-ක්ෂුද්‍ර-එලියුෂන් පද්ධතිය: එය ප්‍රවේණික DNA සාන්ද්‍රණය වැඩි කළ හැකි අතර, එය පහළට හඳුනා ගැනීමට හෝ අත්හදා බැලීමට පහසු වේ.
කට්ටල යෙදුම
පහත දැක්වෙන සාම්පල වලින් ප්‍රවේණික DNA පිරිසිදු කිරීම සඳහා එය සුදුසු වේ: බුකල් ස්පුබ්, FTA කාඩ්පත (රුධිර පැල්ලම්).
ගබඩා කිරීම සහ කල් තබා ගැනීම
-මෙම කට්ටලය කාමර උෂ්ණත්වයේ (15-25 ° C) වියළි තත්වයන් යටතේ මාස 12 ක් ගබඩා කළ හැක;එය දිගු කාලයක් ගබඩා කිරීමට අවශ්ය නම්, එය 2-8 ° C දී ගබඩා කළ හැක.
සටහන: අඩු උෂ්ණත්වයක ගබඩා කර ඇත්නම්, විසඳුම වර්ෂාපතනයට ගොදුරු වේ.භාවිතයට පෙර, යම් කාලයක් සඳහා කාමර උෂ්ණත්වයේ දී කට්ටලය තුළ විසඳුම තැබීමට වග බලා ගන්න.අවශ්ය නම්, වර්ෂාපතනය විසුරුවා හැරීම සඳහා 37 ° C ජල ස්නානයක විනාඩි 10 ක් පෙර රත් කර, භාවිතයට පෙර එය මිශ්ර කරන්න.
-Foregene Protease ද්‍රාවණය අද්විතීය සූත්‍රයක් ඇත, එය දිගු කාලයක් (මාස 3) කාමර උෂ්ණත්වයේ ගබඩා කරන විට සක්‍රීය වේ;එහි ක්රියාකාරිත්වය සහ ස්ථායීතාවය 4 ° C දී ගබඩා කරන විට වඩා හොඳ වනු ඇත, එබැවින් එය 4 ° C දී ගබඩා කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ, එය -20 ° C දී තබා නොගැනීමට මතක තබා ගන්න.
පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව අවහිර වී ඇත
මෙම කට්ටලය තුළ, ප්‍රවේණික DNA නිස්සාරණය කිරීමේ මෙහෙයුමේදී, කේන්ද්රාපසාරී පියවරකින් තොරව නියැදි එන්සයිම ලිසිස් මිශ්‍රණය මත පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සෘජුවම අවශෝෂණය කර ඇති අතර, නියැදියේ අසම්පූර්ණ එන්සයිමීකරණය සහ ඉහළ දුස්ස්රාවීතාවය හේතුවෙන් පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව අවහිර විය හැක.
පහත සඳහන් විය හැකි හේතු පහත පරිදි වේ:
1. පටක සාම්පල අසම්පූර්ණ එන්සයිම ජීර්ණය.
නිර්දේශය: Foregene Protease හි නියැදි සැකසීමේ කාලය සුදුසු පරිදි දීර්ඝ කළ හැකිය, නැතහොත් විනාඩි 5ක් සඳහා 12,000 rpm (~13,400 × g) හි කේන්ද්රාපසාරී කිරීමෙන් පසු අධි ප්‍රවාහය ගත හැක.
2. පටක සාම්පල හෝ විශාල පටක අධික ලෙස භාවිතා කිරීම.
නිර්දේශය: නියැදියේ බුකල් ස්පුබ් 1 නොඉක්මවීම වඩාත් සුදුසුය;නියැදිය ඉතා විශාල නම්, ඒ අනුව බෆර් ST1, Foregene Protease, buffer ST2 මාත්‍රාව වැඩි කරන්න.
3. නියැදි දුස්ස්රාවීතාව ඉතා ඉහළ ය.
නිර්දේශය: සාම්පල ප්‍රවේණික DNA නිස්සාරණයට පෙර Tris-HCl 10 mM සමඟ නිසි ලෙස තනුක කළ හැක.
4. රුධිර කාඩ්පතේ කොටස් උරාබී ඇත.
නිර්දේශය: රුධිර ලප (FTA කාඩ්) ජානමය නිස්සාරණයේ 6 වන පියවරේ තාවකාලික කේන්ද්රාපසාරී කාලය නිසි ලෙස දීර්ඝ කළ හැක.
අඩු අස්වැන්නක් හෝ DNA නැත
නියැදි සම්භවය, නියැදි ගබඩා තත්ත්වයන්, නියැදි සකස් කිරීම, හැසිරවීම යනාදිය ඇතුළුව ජානමය DNA අස්වැන්න කෙරෙහි බලපාන විවිධ සාධක බොහෝ විට ඇත.
නිස්සාරණය කිරීමේදී ජානමය DNA ලබා ගත නොහැක
විය හැකි හේතු පහත පරිදි වේ:
1. සාම්පල අනිසි ලෙස සංරක්ෂණය කිරීම හෝ දිගු කාලයක් ගබඩා කිරීම ප්‍රවේණික DNA ක්ෂය වීමට හේතු වේ.
නිර්දේශය: මුඛ ස්පුබ් නැවුම්ව සාම්පල ලබා ගත යුතු අතර, ජානමය DNA නිස්සාරණය කිරීමේ මෙහෙයුම් සඳහා සංරක්ෂණය කරන ලද ස්පුබ් භාවිතා කිරීම සුදුසු නොවේ;රුධිර පැල්ලම් සාම්පල ගුණාත්මක බව සහතික කළ යුතු අතර ගබඩා කාලය දිගු නොවිය යුතුය.
2. ඉතා කුඩා පටක භාවිතය අනුරූප ජානමය DNA නිස්සාරණය නොකිරීමට හේතු විය හැක.
නිර්දේශය: ප්‍රවේණික ඩීඑන්ඒ නිස්සාරණය සඳහා ප්‍රමාණවත් සෛල මුඛ ස්පුබ් එකට ඇමිණීමට හැකි වන පරිදි මෙහෙයුම් මාර්ගෝපදේශයේ ඇති බුකල් ස්පුබ් නියැදි උපදෙස් අනුගමනය කරන්න, හැකි තරම් වාර ගණනක් පිස දමන්න;රුධිර පැල්ලම් සාම්පල නිස්සාරණය සඳහා, රුධිර පැල්ලම් කැපීමේ ප්රදේශය නිසි ලෙස වැඩි කළ හැක.
3. Foregene Protease නුසුදුසු ලෙස සංරක්ෂණය කර ඇති අතර, එහි ක්රියාකාරිත්වය හෝ අක්රිය වීම අඩු වේ.
නිර්දේශය: Foregene Protease හි ගබඩා තත්ත්වයන් තහවුරු කරන්න හෝ එන්සයිම ප්‍රතික්‍රියාව සඳහා නව Foregene Protease එකක් සමඟ එය ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න.
4. කට්ටලයේ අනිසි ලෙස සංරක්ෂණය කිරීම හෝ ගබඩා කිරීමේ කාලය ඉතා දිගු වන අතර, එහි ප්රතිඵලයක් වශයෙන් කට්ටලයේ සමහර සංරචක අසාර්ථක වේ.
නිර්දේශය: අදාළ ක්‍රියා පටිපාටි සඳහා නව බුකල් ස්පුබ් DNA හුදකලා කට්ටලයක් මිලදී ගන්න.
5. බෆර් WB නිරපේක්ෂ එතනෝල් එකතු නොකරයි.
නිර්දේශය: බෆරය WB නිරපේක්ෂ එතනෝල් වල නිවැරදි පරිමාව එකතු කරන බව තහවුරු කරන්න.
6. සිලිකොන් පටලයට එලියුන්ට් නිවැරදිව එකතු කර නැත.
නිර්දේශය: සිලිකොන් පටලයේ මැදට 65 °C පෙර උනුසුම් කරන ලද එලියුන්ට් බිංදු එකතු කර කාමර උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 5 ක් තබන්න.
අඩු අස්වැන්නක් සහිත ජානමය DNA හුදකලා
පහත සඳහන් විය හැකි හේතු පහත පරිදි වේ:
1. සාම්පල අනිසි ලෙස සංරක්ෂණය කිරීම හෝ දිගු කාලයක් ගබඩා කිරීම ප්‍රවේණික DNA ක්ෂය වීමට හේතු වේ.
නිර්දේශය: මුඛ ස්පුබ් නැවුම් ලෙස සාම්පල ලබා ගැනීම වඩාත් සුදුසු වන අතර ජානමය DNA නිස්සාරණය සඳහා සංරක්ෂණය කර ඇති ස්පුබ් භාවිතා නොකළ යුතුය.
2. පටක සාම්පල ප්‍රමාණය ඉතා කුඩා නම්, නිස්සාරණය කරන ලද ජානමය DNA අන්තර්ගතය අඩු වේ.
නිර්දේශය: ප්‍රවේණික DNA නිස්සාරණය සඳහා ප්‍රමාණවත් සෛල මුඛ ස්පුබ් එකට සම්බන්ධ කළ හැකි වන පරිදි හැකි තරම් වාර ගණනක් පිසදමමින්, මෙහෙයුම් මාර්ගෝපදේශයේ ඇති මුඛ ස්පුබ් නියැදීමේ උපදෙස් අනුගමනය කරන්න.
3. Foregene Protease නුසුදුසු ලෙස සංරක්ෂණය කර ඇති අතර, එහි ක්රියාකාරිත්වය හෝ අක්රිය වීම අඩු වේ.
නිර්දේශය: Foregene Protease හි ගබඩා තත්ත්වයන් තහවුරු කරන්න හෝ එන්සයිම ප්‍රතික්‍රියාව සඳහා නව Foregene Protease එකක් සමඟ එය ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න.
4. එලියුන්ට් ගැටළු.
නිර්දේශය: elution සඳහා Buffer EB භාවිතා කරන්න;ddH භාවිතා කරන්නේ නම්2O හෝ වෙනත් eluents, eluate හි pH අගය 7.0-8.5 අතර බව තහවුරු කරන්න.
5. eluate නිවැරදිව dropwise එකතු කර නැත.
නිර්දේශය: සිලිකොන් පටලයේ මැදට එලියුන්ට් බිංදු එකතු කර කාමර උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 5 ක් තබන්න.
6. එලියුෂන් දියර ඉතා සුළු වශයෙන් එකතු වේ.
නිර්දේශය: අවම වශයෙන් 15 μl ට නොඅඩු, උපදෙස් වල අවශ්ය පරිදි ප්‍රවේණික DNA ඉවත් කිරීම සඳහා elluent භාවිතා කරන්න.
හුදකලා වූ ජානමය DNA වල අඩු සංශුද්ධතාවය
අඩු ප්‍රවේණික DNA සංශුද්ධතාවය අසාර්ථක වීමට හෝ පහළ මට්ටමේ පර්යේෂණවල අසතුටුදායක ප්‍රතිඵලවලට හේතු විය හැක, එනම්: එන්සයිම විවෘත කළ නොහැක, PCR හට උනන්දුව දක්වන ජාන කැබැල්ල ලබා ගත නොහැක, යනාදිය.
විය හැකි හේතු පහත පරිදි වේ:
1. Heteroprotein දූෂණය, RNA දූෂණය.
විශ්ලේෂණය: පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව බෆර් PW භාවිතයෙන් සෝදා නැත;බෆර් PW වොෂ් පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව නිවැරදි කේන්ද්රාපසාරී වේගය භාවිතයෙන් සෝදා නැත.
නිර්දේශය: එතනෝල් එකතු කිරීමට පෙර අධි ප්‍රවාහයේ වර්ෂාපතනයක් නොමැති බව සහතික කර ගන්න;උපදෙස් අනුව පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සේදීමට වග බලා ගන්න, මෙම පියවර මඟ හැරිය නොහැක.
2. අපිරිසිදු අයන දූෂණය.
විශ්ලේෂණය: බෆර් WB වොෂ් පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව ඉවත් කර හෝ එක් වරක් පමණක් සෝදා ඉවත් කර ඇති අතර, එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස අවශේෂ අයනික අපවිත්‍ර වීම සිදු විය.
නිර්දේශය: හැකිතාක් දුරට අවශේෂ අයන ඉවත් කිරීම සඳහා බෆර් WB 2 වතාවක් සේදීමට වග බලා ගන්න.
3. RNA එන්සයිම දූෂණය.
විශ්ලේෂණය: විදේශීය RNases බෆරයට එකතු කරන ලදී;බෆර PW සේදීමේ ක්රියාකාරිත්වය වැරදි වූ අතර, එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස RNase අවශේෂ, in vitro transcription වැනි පහළ RNA පර්යේෂණාත්මක මෙහෙයුම් වලට බලපායි.
නිර්දේශය: Foregene ශ්‍රේණියේ න්‍යෂ්ටික අම්ල හුදකලා කට්ටලවලට RNase අතිරේක එකතු කිරීමකින් තොරව RNA ඉවත් කළ හැක, එබැවින් buccal Swab/FTA කාඩ්පත් DNA හුදකලා කට්ටලය RNase එකතු කිරීම අවශ්ය නොවේ;Buffer PW සෝදා පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සඳහා උපදෙස් අනුගමනය කිරීමට වග බලා ගන්න, මෙම පියවර මඟ හැරිය නොහැක.
4. එතනෝල් අවශේෂ.
විශ්ලේෂණය: Buffer WB පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සේදීමෙන් පසු හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී කිරීම සිදු නොකළේය.
නිර්දේශය: උපදෙස් අනුව නිවැරදි හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී මෙහෙයුම සිදු කරන්න.
5. වෙනත් අපිරිසිදු දූෂණය.
විශ්ලේෂණය: සුරකින ලද සාම්පල හෝ විශේෂ සාම්පල පූර්ව ප්‍රතිකාර නොකෙරේ.
නිර්දේශය: උපදෙස් දී ඇති පරිදි නියැදිය තරයේ පෙරට ගන්න.
