• ෆේස්බුක්
  • linkedin
  • youtube

මෑතකදී, මම පුදුම දෙයක් සොයාගත්තා!ඔහු වටා සිටින බොහෝ දියුණු අත්හදා බැලීම් වෘත්තිකයන් ඉතා මූලික පර්යේෂණාත්මක දැනුමක් පවා නොදනී.

උදාහරණයක් ලෙස, ඔබට පහත ප්‍රශ්නවලට පිළිතුරු දිය හැකිද?

OD260 සහ A260 අතර වෙනසක් තිබේද?එක් එක් අදහස් කරන්නේ කුමක්ද?
OD යනු දෘශ්‍ය ඝනත්වයේ (ප්‍රකාශ ඝනත්වයේ) කෙටි යෙදුමයි, A යනු අවශෝෂණයේ (අවශෝෂණයේ) සංක්ෂිප්තයයි, මෙම සංකල්ප දෙක ඇත්ත වශයෙන්ම සමාන වේ, "ප්‍රකාශ ඝනත්වය" යනු "අවශෝෂණය" වේ, නමුත් "දෘෂ්‍ය ඝනත්වය" බොහෝ ජාතික ප්‍රමිතීන්ට අනුකූල වන අතර වඩාත් ප්‍රමිතිගත වේ.

සාමාන්‍යයෙන් අපි න්‍යෂ්ටික අම්ල සාන්ද්‍රණය ගණනය කිරීම සඳහා OD අගය 260nm හිදී මනිමු, එසේනම් 1OD නියෝජනය කරන්නේ කුමක්ද?
න්‍යෂ්ටික අම්ලය 260nm තරංග ආයාමයකින් උපරිම අවශෝෂණ උච්චස්ථානයක් ඇති අතර, DNA සහ RNA යන දෙකම අඩංගු වන අතර, ඛණ්ඩනය වූ න්‍යෂ්ටික අම්ල කොටස් (මෙය ප්‍රධාන කරුණයි).
260 nm තරංග ආයාමයකින් මනින ලද OD අගය OD260 ලෙස සටහන් විය.නියැදිය පිරිසිදු නම්, OD260 අගයට න්‍යෂ්ටික අම්ල සාම්පලයේ සාන්ද්‍රණය ගණනය කළ හැක.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (ද්විත්ව නූල් DNA)
=37 μg/ml ssDNA (තනි නූල් DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ)
RT-PCR, Realtime-PCR සහ QPCR අතර කිසියම් සම්බන්ධයක් සහ වෙනසක් තිබේද?
RT-PCR යනු ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ PCR සඳහා කෙටි වේ
Real Time PCR=qPCR, Quantitative Real Time PCR සඳහා කෙටි
Real Time PCR (real-time fluorescent quantitative PCR) සහ Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) යන දෙකම RT-PCR ලෙස කෙටි කර ඇති බව පෙනේ.නමුත් ජාත්‍යන්තර සම්මුතිය නම්: RT-PCR විශේෂයෙන් ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ PCR වෙත යොමු කරයි.

ජීව විද්‍යාවේ DNA/RNA වල දිග විස්තර කිරීමට බහුලව භාවිතා වන nt, bp, සහ kb මොනවාද?
nt = නියුක්ලියෝටයිඩ
bp = මූලික යුගල මූලික යුගල
kb = කිලෝබේස්

ඇත්ත වශයෙන්ම, බොහෝ අය මෙම කුඩා විස්තර ගැන තැකීමක් නොකරන බව ඔබ කියනු ඇත!සෑම කෙනෙකුම මෙය කරයි, එය කුමක්දැයි කිසිවෙකු ඔබෙන් අසන්නේ නැත.මෙය අනවශ්‍ය බව ඔබ දන්නවා නේද?

නැහැ, නැහැ, නැහැ, මෙය දැන ගැනීම ඉතා අවශ්යයි!කුමක් නිසාද?
ඔබට ලිපියක් පළ කිරීමට අවශ්‍ය නිසා!සහෝදරයා!ඔබ උපාධියක් ලබා ගැනීමට හෝ විද්‍යාත්මක පර්යේෂණ ජයග්‍රහණ හඹා යාමට ඉලක්ක කරගෙන සිටියත්, ඔබ කතා කිරීමට ලිපි මත විශ්වාසය තැබිය යුතුය!

න්යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණය සරලම හා මූලික අත්හදා බැලීම විය යුතුය.න්යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණයේ ගුණාත්මක භාවය පසුව සිදු කරන ලද අත්හදා බැලීම්වල ප්රතිඵල සෘජුව තීරණය කරයි.

මම කීප සැරයක් කිව්වත් ගණන් ගන්නෙ නැති යාළුවො ඕන තරම් ඉන්නවා.මේ වතාවේ මම ලිපියෙන් ඉවත් වීමට තීරණය කළා!

රූපය1
MIQE ලෙස හඳුන්වන ප්‍රමාණාත්මක තත්‍ය කාලීන PCR අත්හදා බැලීම් ප්‍රකාශනය සඳහා අවම තොරතුරු, යනු ජාත්‍යන්තරව දියත් කරන ලද ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක පරීක්ෂණ මාර්ගෝපදේශ සමූහයකි, එය ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR අත්හදා බැලීම් සහ ලිපි ප්‍රකාශනය ඇගයීම සඳහා අවශ්‍ය පර්යේෂණාත්මක තොරතුරු සඳහා අවම ප්‍රමිතීන් යෝජනා කරයි.පරීක්‍ෂකවරයා විසින් සපයනු ලබන පර්යේෂණාත්මක කොන්දේසි සහ විශ්ලේෂණ ක්‍රම හරහා, සමාලෝචකයින්ට පර්යේෂකයාගේ පර්යේෂණාත්මක යෝජනා ක්‍රමයේ වලංගුභාවය වඩා හොඳින් ඇගයීමට ලක් කළ හැක.
රූපය2
න්‍යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණයේ කොටසේ පහත හඳුනාගැනීමේ අයිතම යෝජනා කර ඇති බව දැකිය හැක.

“E” මඟින් සැපයිය යුතු තොරතුරු සහ “D” යන්නෙන් අවශ්‍ය නම් සැපයිය යුතු තොරතුරු දක්වයි.

පෝරමය ඉතා සංකීර්ණයි, ඇත්ත වශයෙන්ම, සෑම කෙනෙකුම ආරම්භ කළ යුතු බව මට පැවසීමට අවශ්යය

සංශුද්ධතාවය (D), අස්වැන්න (D), අඛණ්ඩතාව (E) සහ අනුකූලතාව (E) මෙම අංශ හතරෙහි න්යෂ්ටික අම්ල ඇගයීමට.

පර්යේෂණාත්මක පුරුදු අනුව, පළමුව සංශුද්ධතාවය සහ සාන්ද්‍රණය පිළිබඳ ඇගයීමේ ක්‍රම ගැන කතා කරන්න.

OD මැනීම යනු අත්හදා බැලීම් කරන්නන් සඳහා ප්‍රියතම සහ පහසුම හඳුනාගැනීමේ ක්‍රමයයි.මූලධර්මය සම්බන්ධයෙන්, මම මෙහි විස්තර වෙත නොයමි.බොහෝ විද්‍යාගාර දැන් න්‍යෂ්ටික අම්ල සාම්පල සෘජුව ප්‍රමාණාත්මකව විශ්ලේෂණය කිරීම සඳහා අතිශය ක්ෂුද්‍ර වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමාන භාවිතා කරයි.අවශෝෂණ අගය ප්‍රදර්ශනය කරන අතරතුර, වැඩසටහන සෘජුවම සාන්ද්‍රණ අගය (න්‍යෂ්ටික අම්ලය, ප්‍රෝටීන් සහ ප්‍රතිදීප්ත සායම්) සහ අදාළ අනුපාත ලබා දෙයි.OD අගය විශ්ලේෂණය සඳහා, මෙම පින්තූරය සුරකින්න, එවිට ඔබ හොඳින් වනු ඇත.

විශ්ව OD අගය විසඳුම් ලැයිස්තුව

රූපය3කෙසේ වෙතත්, ඔබ වෙනුවෙන් වෙන වෙනම ගෙන ආ යුතු අනතුරු ඇඟවීම් කිහිපයක් තිබේ.

(සියල්ලට පසු, මම දන්නවා ඔබ ඉතිරි කරන අය විය යුතු අතර ඔබට ඒවා අවශ්‍ය වන තෙක් බලා සිටින්න!)

සටහන 1 උපකරණ

OD අගය විවිධ උපකරණ මගින් බලපානු ඇත.OD260 නිශ්චිත පරාසයක් තුළ පවතින තාක්, OD230 සහ OD280 අගයන් අර්ථවත් වේ.උදාහරණයක් ලෙස, 260nm හි පොදු Eppendorf D30 හි අවශෝෂණ පරාසය 0~ 3A වන අතර NanoDrop One of Thermo 260nm වේ.අවශෝෂණ පරාසය 0.5 ~ 62.5A.

සටහන 2තනුක ප්රතික්රියාකාරකය

විවිධ ප්‍රතික්‍රියාකාරක තනුක කිරීම මගින් OD අගය බලපෑ හැකිය.උදාහරණයක් ලෙස, pH අගයෙන් පිරිසිදු RNA වල OD260/280 කියවීම7.5 10 මි.මී ට්‍රිස්බෆරය 1.9-2.1 අතර වේඋදාසීන ජලීය ද්රාවණයඅනුපාතය අඩු වනු ඇත, සමහර විට 1.8-2.0 පමණි, නමුත් මෙයින් අදහස් කරන්නේ RNA වල ගුණාත්මක භාවය වෙනස් වන බව නොවේ.

සටහන 3අවශේෂ ද්රව්ය

අවශේෂ ද්‍රව්‍යවල පැවැත්ම න්‍යෂ්ටික අම්ල සාන්ද්‍රණය මැනීමේ නිරවද්‍යතාවයට බලපානු ඇත, එබැවින් න්‍යෂ්ටික අම්ල සාම්පලවල ප්‍රෝටීන්, ෆීනෝල්, පොලිසැකරයිඩ සහ පොලිෆෙනෝල් අපද්‍රව්‍ය හැකිතාක් වළක්වා ගැනීම අවශ්‍ය වේ.

කෙසේ වෙතත්, ඇත්ත වශයෙන්ම, කාබනික ප්රතික්රියාකාරක සමඟ නිස්සාරණය කිරීම පැරණි ක්රමයකි.වාණිජ කට්ටල වලදී, ඉවත් කිරීමට අපහසු විෂ සහිත හා හානිකර කාබනික ප්‍රතික්‍රියාකාරක වළක්වා ගැනීම, ආදිය කේන්ද්‍රාපසාරණය සමඟ ඒකාබද්ධව සිලිකා පදනම් වූ අවශෝෂණ තීරුවක් හරහා නිස්සාරණය කිරීමේ බලපෑම ලබා ගත හැක. ගැටළුව, වැනිForegene හි න්‍යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණ කට්ටලය, DNase/RNase සහ විෂ සහිත කාබනික ප්‍රතික්‍රියාකාරක, වේගවත් හා ආරක්ෂිත මෙහෙයුම පුරාවට භාවිතා නොකරයි., සහබලපෑම වේයහපත(අහම්බෙන් කීවේ එය තට්ටය බව, නමුත් මම දන්නවා ඔබට දැන ගැනීමට අවශ්‍ය බව).

උදාහරණ 1: ජානමය DNA නිස්සාරණය අස්වැන්න සහ සංශුද්ධතාවය

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) විවිධ ප්‍රභවයන්ගෙන් පාංශු සාම්පල ප්‍රතිකාර කරන අතර, ලබාගත් ජානමය DNA වල ප්‍රමාණය සහ සංශුද්ධතාවය පහත වගුවේ දක්වා ඇත:
රූපය4උදාහරණ 2: පටක RNA නිස්සාරණය අස්වැන්න සහ සංශුද්ධතාවය

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) විවිධ පටක සාම්පල සැකසූ අතර, ලබාගත් RNA ප්‍රමාණය සහ සංශුද්ධතාවය පහත වගුවේ දක්වා ඇත (මූසික පටක සඳහා):
රූපය5කෙසේ වෙතත්, ඔබ OD අගය සමඟ අවසන් යැයි නොසිතන්න.මම ඔබ වෙනුවෙන් ඉදිරියෙන් ඇන්ද ප්‍රධාන කරුණු ගැන ඔබට යම් සැලකිල්ලක් තිබේද?

දැනුම්දීම

ඛණ්ඩනය වූ න්‍යෂ්ටික අම්ල අණු ද අවශෝෂණයේදී ගණනය කරනු ලැබේ.ඔබ RNA තුළ ප්‍රවේණික DNA අපද්‍රව්‍ය ඇතැයි උපකල්පනය කළහොත්, ඔබේ OD අගය ඉතා ඉහළ බව පෙනෙනු ඇත, නමුත් RNA හි සැබෑ සාන්ද්‍රණය තීරණය කළ නොහැක.ඔබගේ ආර්එන්ඒ යනු ක්ෂය වීමක් තිබේද යන්න පැහැදිලි නැත, එබැවින් වඩාත් නිවැරදි විනිශ්චයක් ලබා දීමට අපට තවමත් පුළුල් ඇගයීම් ක්‍රමයක් අවශ්‍ය වේ, එනම් MIQE හි සඳහන් න්‍යෂ්ටික අම්ල අඛණ්ඩතා ඇගයීම.


පසු කාලය: ජනවාරි-13-2022