සාම්ප්‍රදායික ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් වලට ඉහළ උෂ්ණත්වයන් දරාගත නොහැක (MMLV ක්‍රියාකාරකම් සඳහා ප්‍රශස්ත උෂ්ණත්වය 37-50 ° C වන අතර AMV 42-60 ° C වේ).වඩාත් සංකීර්ණ වෛරස් ආර්එන්ඒ අඩු උෂ්ණත්වවලදී cDNA බවට ප්‍රතිවර්තනය කළ නොහැක, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස හඳුනාගැනීමේ කාර්යක්ෂමතාව අඩු වේ.සාම්ප්‍රදායික RT-qPCR සඳහා සාමාන්‍යයෙන් ප්‍රධාන එන්සයිම දෙකක (ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් සහ DNA පොලිමරේස්) සහභාගීත්වය අවශ්‍ය වේ, එමඟින් ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියේ ක්‍රියාකාරිත්වය සරල කිරීමට සහ පිරිවැය අඩු කිරීමට නොහැකි වේ.මෙහිදී අපි TtH සහ RevTaq යන ඉහළ-උෂ්ණත්වයට ඔරොත්තු දෙන ප්‍රතිලෝම පිටපත් දෙකක් හඳුන්වා දෙන්නෙමු.මෙම එන්සයිම දෙක DNA පොලිමරේස් වල ක්‍රියාකාරිත්වය ද ඇති බැවින් ඒවා ද්වි ක්‍රියාකාරී එන්සයිම ලෙස හැඳින්වේ.

TtH DNA පොලිමරේස්

Thermophilic බැක්ටීරියාව Thermus thermophilus HB8 වලින් ව්‍යුත්පන්න වූ TtH ගැන ඔබ අසා ඇති.Mg2+ වැනි ද්විසංයුජ කැටායන ඉදිරියේ, එය DNA පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරිත්වය ඇත.එය Taq එන්සයිම වැනි PCR ප්‍රතික්‍රියා වල බහුලව භාවිතා වේ, නමුත් එය Taq එන්සයිමයට වඩා ඉහළ තාප ප්‍රතිරෝධයක් ඇත, එබැවින් එය ඉහළ GC අන්තර්ගත සැකිලි සහිත PCR මත ද වඩා හොඳ බලපෑමක් ඇති කරයි.

· මෙම එන්සයිමයට මූලික වශයෙන් 3′→5′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම් සහ 5′→3′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම් නොමැත, එබැවින් එය dideoxy අනුක්‍රමණය සඳහා ද භාවිතා කළ හැක.

· මෙම එන්සයිමයේ RTase ක්‍රියාකාරකම් ඇත.Mn2+ ඉදිරියේ, RTase ක්‍රියාකාරකම් වැඩි දියුණු වනු ඇත.මෙම විශේෂාංගය භාවිතා කරමින්, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතික්‍රියාව සහ PCR ප්‍රතික්‍රියාව එකම නළය තුළ සිදු කිරීමට භාවිතා කළ හැක, එනම් එක්-පියවර RT-PCR.කෙසේ වෙතත්, Mn2+ ඉදිරියේ, RT-PCR හි නිරවද්‍යතාවය ඉහළ නොවේ.RT ක්‍රියාකාරකම rnaase H ක්‍රියාකාරකම් සමඟ කිසිදු සම්බන්ධයක් නැත.

· Tth-DNA පොලිමරේස් (pH9, ප්‍රශස්ත +55℃～+70℃, උපරිම +95℃) හි වැඩි ක්‍රියාකාරීත්වය RNA ද්විතියික ව්‍යුහය නිසා ඇතිවන ගැටලු ජය ගනී.Mg2+ අයන ඉදිරියේ එම එන්සයිමය සමඟින් ලැබෙන cDNA PCR මගින් විස්තාරණය කළ හැක.

· Tth-DNA පොලිමරේස් වලට ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම සහ DNA විස්තාරණය කිරීමේ හැකියාව මෙම එන්සයිමය සෛලීය සහ වෛරස් RNA වල ප්‍රමාණාත්මක RT-PCR, ක්ලෝනකරණය සහ ජාන ප්‍රකාශන විශ්ලේෂණය සඳහා ප්‍රයෝජනවත් වේ.
RT-PCR සඳහා Tth-DNA පොලිමරේස් RNA 1kb දක්වා වර්ධක කිරීමට භාවිතා කරයි.

විශේෂාංග සහ වාසි

Tth DNA පොලිමරේස්:

• ප්‍රශස්ත පොලිමරේස් දාම ප්‍රතික්‍රියාව (PCR) නිෂ්පාදන ප්‍රමාණය සහතික කිරීම, RT-PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ අවම වශයෙන් 1000 bp

• උපස්ථරයක් ලෙස වෙනස් කරන ලද deoxyribonucleoside triphosphate පිළිගන්න

• RNase H ක්‍රියාකාරකමට සම්බන්ධ නොවේ

• සාමාන්‍යයෙන් RNA හි පවතින ඉහළ ද්විතියික ව්‍යුහයට සම්බන්ධ ගැටළු ජය ගැනීම සඳහා ඉහළ තාප ස්ථායීතාවයක් ඇත.

RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස්

ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් ක්‍රියාකාරකම් සහිත තාප ප්‍රතිරෝධී DNA පොලිමරේස්

RevTaq-RT-PCR-DNA පොලිමරේස් යනු අධ්‍යක්ෂණය සහ කෘතිම පරිණාමය හරහා ලබාගත් ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් සහ DNA පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම් සහිත ඉංජිනේරුමය, ඉහළ තාප ප්‍රතිරෝධී, ද්විත්ව ක්‍රියාකාරී එන්සයිමයකි.

· 95°C දී RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් වල අර්ධ ආයු කාලය විනාඩි 40කට වඩා වැඩි වේ.

· RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් RNA අච්චුවෙන් සෘජුවම ඉහළ-උෂ්ණත්වයේ ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමට ඉඩ සලසයි, සහ තවත් cDNA සැකිලි ජනනය කිරීම සඳහා ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පියවර කිහිප වතාවක් නැවත නැවතත් කළ හැක.

· RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් "ශුන්‍ය-පියවර" RT-PCR (සමය තාප ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පියවරක් නොමැත) ඉඩ ලබා දේ, මන්ද චක්‍රීය PCR දිගු කිරීමේ පියවරේදී, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම සහ DNA විස්තාරණය එකවර සිදු වේ.මෙය ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතික්‍රියාව ද ප්‍රවර්ධනය කරයි, එමඟින් ඉහළ උෂ්ණත්වවලදී RNA හි ශක්තිමත් ද්විතියික ව්‍යුහය උණු කිරීමේදී ඇතිවන ගැටළු අවම කරයි.

· aptamer මත පදනම් වූ උණුසුම්-ආරම්භක සූත්‍රය හේතුවෙන්, RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් මගින් ඇනීම් සහ විස්තාරණ උෂ්ණත්වය 57 ° C ට වඩා වැඩි වන විට වඩා හොඳ ප්‍රතිඵල නිපදවනු ඇත.

· එන්සයිම තාප-ප්‍රතිරෝධී බැවින්, ඉතා ඉහළ ද්‍රවාංක (>60°C) සහිත ප්‍රයිමර් සහ පරීක්ෂණ සැලසුම් කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.

· ප්‍රතික්‍රියා සැකසීමේ ක්‍රියාවලියේදී උෂ්ණත්ව අනුක්‍රමණයක් හරහා ඇනීලිං/දිගු කිරීමේ පියවරේ උෂ්ණත්වය ප්‍රශස්ත කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.

· උෂ්ණත්වය වැඩි වන තරමට PCR හි විශේෂත්වය වැඩි වේ.ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ චක්‍රය සාමාන්‍යයෙන් PCR චක්‍රයට වඩා ඉහළ උෂ්ණත්වයකදී සිදු කරනු ලැබේ, මන්ද DNA ප්‍රයිමර්:RNA සැකිලි දෙමුහුන් සාමාන්‍යයෙන් DNA ප්‍රයිමර්:cDNA අච්චු ඩුප්ලෙක්ස් වලට වඩා වැඩි ද්‍රවාංකයක් ඇති බැවිනි.

· RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් ජානමය වශයෙන් නිර්මාණය කර ප්‍රශස්ත කර ඇති අතර ඇම්ප්ලිකන් ප්‍රමාණය 60-300 bp අතර වේ.

RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් හඳුනාගැනීමේ සීමාව පිටපත් 4කට ළඟා වේ/

ප්‍රශස්ත ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය (ඉහළ ද්‍රවාංක ප්‍රාථමික පිහිටුවීම) රූපයේ දැක්වේ.RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස්-ධාවනය කරන RT-PCR TaqPath 1-පියවර RT-qPCR ප්‍රධාන මිශ්‍රණයට වඩා හොඳ සංවේදීතාවයක් පෙන්නුම් කරයි, සහ අඩු හඳුනාගැනීමේ නියැදි තනුක අනුක්‍රමය.

තවත් වාසි:

ඉක්මන් ආරම්භක කාර්යය → මූලික තාප පිරිහීමේ පියවර මඟ හැරිය හැක.

උණුසුම්-ආරම්භක aptamer සූත්‍රය → 100% එන්සයිම ක්‍රියාකාරකම් වහාම සපයන අතර අඩු උෂ්ණත්වවලදී (<57°C) විශේෂිත නොවන විස්තාරණය වළක්වන්න.

Cleavage function → RevTaq RT-PCR DNA පොලිමරේස් ද බොර ප්‍රතික්‍රියා සාම්පල සැකසීමට හැකි නිසා RNA නිස්සාරණ පියවර මඟ හැර ඇත.එය උණුසුම් RT-PCR චක්‍රයක් තුළ යුකැරියෝටේ, බැක්ටීරියා සහ වෛරස් වල සෛල පටල වහාම විනාශ කළ හැකිය.

IVD අමුද්‍රව්‍ය මට්ටම → උසස් තත්ත්වයේ ප්‍රමිතීන් සහ අතිශය තරඟකාරී මිල ගණන්