ගැටළු විශ්ලේෂණ මාර්ගෝපදේශය

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

අඩු අස්වැන්නක් හෝ DNA නැත

සාම්පලයේ මූලාශ්‍රය, නියැදියේ වයස, නියැදියේ ගබඩා තත්ත්‍වය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය ඇතුළුව සාමාන්‍යයෙන් ජානමය DNA වල අස්වැන්න කෙරෙහි බලපාන බොහෝ සාධක ඇත.

නිස්සාරණය කිරීමේදී ජානමය DNA ලබා ගත නොහැකි විය

1. පටක සාම්පල නුසුදුසු ලෙස ගබඩා කර හෝ දිගු කාලයක් ගබඩා කර ඇති අතර, ප්‍රවේණි DNA වල ක්ෂය වීමට හේතු වේ.

නිර්දේශය: දියර නයිට්රජන් හෝ -20 තුළ පටක සාම්පල ගබඩා කරන්න°C;ජානමය DNA නිස්සාරණය සඳහා අලුතින් එකතු කරන ලද සාම්පල භාවිතා කිරීමට උත්සාහ කරන්න.

2. ඉතා කුඩා නියැදි ප්‍රමාණයක් අනුරූප ජානමය DNA නිස්සාරණය නොකිරීමට හේතු විය හැක.

යෝජනාව: දිගු කාලයක් ගබඩා කර ඇති පටක සාම්පල සඳහා හෝ දැඩි ජානමය DNA හායනය ඇති පටක සාම්පල සඳහා සැලකිය යුතු ප්‍රවේණික DNA නිස්සාරණය කිරීම සඳහා පටක සාම්පල ප්‍රමාණය නිසි ලෙස වැඩි කළ හැක.DNA අවශ්‍යතා අනුව නියැදියේ ප්‍රමාණය තීරණය කළ හැකි නමුත් නැවුම් නියැදිය 100mg නොඉක්මවිය යුතු අතර වියළි නියැදිය 30mg නොඉක්මවිය යුතුය.

3. නියැදිය ද්‍රව නයිට්‍රජන් සමඟ ඇඹරීම හෝ ද්‍රව නයිට්‍රජන් පසු වැඩි කාලයක් තබා නැත.

යෝජනාව: DNA නිස්සාරණය අතරතුර, සෛල බිත්තිය බිඳ දැමීම සඳහා නියැදිය සම්පූර්ණයෙන්ම දියර නයිට්‍රජන් සමඟ ඇඹරීමට අවශ්‍ය වේ;ඇඹරීමෙන් පසු, කරුණාකර සාම්පල කුඩු 65 ට පෙර රත් කළ PL1 වෙත මාරු කරන්න°C හැකි ඉක්මනින් (බිම් කුඩු උණු කළ පසු, ජානමය DNA වේගයෙන් ක්ෂය වීමට පටන් ගනී) .

4. Foregene Protease අනිසි ලෙස ගබඩා කිරීම නිසා ක්‍රියාකාරකම් අඩු වීම හෝ අක්‍රිය වීම සිදු වේ.

නිර්දේශය: Foregene Protease හි ගබඩා තත්ත්වයන් තහවුරු කරන්න හෝ එන්සයිම ජලවිච්ඡේදනය සඳහා නව Foregene Protease එකක් සමඟ එය ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න.

5. කට්ටලය නුසුදුසු ලෙස ගබඩා කර හෝ දිගු කාලයක් ගබඩා කර ඇති අතර, කට්ටලයේ සමහර සංරචක අසාර්ථක වීමට හේතු වේ.

නිර්දේශය: අදාළ මෙහෙයුම් සඳහා නව ශාක ජානමය DNA නිස්සාරණ කට්ටලයක් මිලදී ගන්න.

6. කට්ටලය අනිසි ලෙස භාවිතා කිරීම.

යෝජනාව: ශාක ප්‍රවේණික DNA නිස්සාරණය සහ පිරිසිදු කිරීම සඳහා සාම්පල සඳහා කැප වූ ශාක DNA හුදකලා කට්ටලයක් මිලදී ගන්න.

7. බෆර් WB එකතු නොකරනිර්ජලීය එතනෝල්.

නිර්දේශය: නිරපේක්ෂ එතනෝල් වල නිවැරදි පරිමාව Buffer WB වෙත එක් කිරීමට වග බලා ගන්න.

8. සිලිකා පටලය මතට ප්‍රවාහය නිවැරදිව කාන්දු නොවීය.

යෝජනාව: 65 ට පෙර රත් කළ එලියුන්ට් එකතු කරන්න℃සිලිකා ජෙල් පටලයේ මැදට පහතට ඇද දමන්න, ඉවත් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි කිරීම සඳහා කාමර උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 5 ක් තබන්න.

අඩු අස්වැන්නක් සහිත ජානමය DNA ලබා ගැනීම සඳහා නිස්සාරණය

1. නියැදිය නුසුදුසු ලෙස ගබඩා කර හෝ දිගු කාලයක් ගබඩා කර ඇති අතර, ප්‍රවේණි DNA වල ක්ෂය වීමට හේතු වේ.

නිර්දේශය: පටක සාම්පල -20 හි ගබඩා කරන්න℃;ජානමය DNA නිස්සාරණය සඳහා අලුතින් එකතු කරන ලද පටක සාම්පල භාවිතා කිරීමට උත්සාහ කරන්න.

2. පටක සාම්පල ප්‍රමාණය ඉතා කුඩා නම්, නිස්සාරණය කරන ලද ජානමය DNA අඩු වේ.

යෝජනාව: සමහර ශාක සාම්පල ජලයෙන් පොහොසත් වන අතර, ඇල්ගී වැනි ජලජ ශාක ආදිය, මාත්‍රාව නිසි ලෙස වැඩි කළ හැකිය, නැතහොත් මෙහෙයුමට පෙර ජලය මඳක් විජලනය කළ හැකිය.

3. සාම්පල ද්‍රව නයිට්‍රජන් සමඟ හොඳින් ඇඹරීම හෝ ඇඹරීමෙන් පසු බොහෝ වේලාවක් කාමර උෂ්ණත්වයේ තබා ඇත.

යෝජනාව: දියර නයිට්රජන් ඇඹරීම ප්රමාණවත් විය යුතු අතර, නියැදි සෛල බිත්තිය හැකි තරම් බිඳ දැමිය යුතුය;ඇඹරීමෙන් පසු වහාම නියැදි කුඩු 65 ට මාරු කළ යුතුය℃මීළඟ පියවර සඳහා පෙර රත් කළ බෆර් PL1.

4. නිවැරදි කට්ටලය භාවිතා නොකිරීම.

නිර්දේශය: ශාක ප්‍රවේණික DNA නිස්සාරණය කර පිරිසිදු කිරීමට කැප වූ ශාක DNA හුදකලා කට්ටලයක් භාවිතා කරන්න.

5. Foregene Protease අනිසි ලෙස ගබඩා කිරීම නිසා ක්‍රියාකාරකම් අඩු වීම හෝ අක්‍රිය වීම සිදු වේ.

නිර්දේශය: Foregene Protease හි ගබඩා තත්ත්වයන් තහවුරු කරන්න හෝ එන්සයිම ජලවිච්ඡේදනය සඳහා නව Foregene Protease එකක් සමඟ එය ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න.

6. එලියුන්ට් ගැටළුව

නිර්දේශය: කරුණාකර elution සඳහා Buffer EB භාවිතා කරන්න;ddH භාවිතා කරන්නේ නම්₂O හෝ වෙනත් eluents, eluent වල pH අගය 7.0-8.5 අතර ඇති බවට වග බලා ගන්න.

7. ප්‍රවාහය නිවැරදිව කාන්දු නොවේ

යෝජනාව: කරුණාකර සිලිකා පටලයේ මැදට elution drop එකතු කර විනාඩි 5ක් කාමර උෂ්ණත්වයේ තබන්න.

8. එලියුන්ට් පරිමාව ඉතා කුඩාය

යෝජනාව: කරුණාකර අවම වශයෙන් 100 ට නොඅඩු උපදෙස් අනුව ප්‍රවේණික DNA ඉවත් කිරීම සඳහා ප්‍රවාහකය භාවිතා කරන්නμl.

අඩු සංශුද්ධතාවයකින් උපුටා ගත් ජානමය DNA

ප්‍රවේණික DNA වල අඩු සංශුද්ධතාවය, පහල ගංවතුර අත්හදා බැලීම්වල අසාර්ථකත්වයට හෝ දුර්වල බලපෑමට තුඩු දෙනු ඇත, එනම්: එන්සයිමය කපා හැරිය නොහැක, සහ ඉලක්කගත ජාන කොටස PCR මගින් ලබා ගත නොහැක.

1. විවිධ ප්‍රෝටීන් දූෂණය, RNA දූෂණය.

විශ්ලේෂණය: තීරුව සේදීම සඳහා බෆර් PW භාවිතා නොකළේය;නිවැරදි කේන්ද්‍රාපසාරී වේගයකින් තීරුව සේදීම සඳහා බෆර් PW භාවිතා නොකළේය.

යෝජනාව: ස්ථම්භය හරහා සුපර්නාටන්ට් සම්මත කරන විට, එහි වර්ෂාපතනයක් නොමැති බව සහතික කිරීමට උත්සාහ කරන්න;උපදෙස් අනුව Buffer PW සමඟ පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සේදීමට වග බලා ගන්න, මෙම පියවර මඟ හැරිය නොහැක.

2. අපිරිසිදු අයන දූෂණය.

විශ්ලේෂණය: Buffer WB වොෂ් තීරුව ඉවත් කර හෝ එක් වරක් පමණක් සෝදා ඇති අතර, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස අවශේෂ අයනික අපවිත්‍ර වීම සිදු විය.

නිර්දේශය: අවශේෂ අයන හැකිතාක් ඉවත් කිරීමට උපදෙස් අනුව බෆර් WB සමඟ දෙවරක් සේදීමට වග බලා ගන්න.

3. RNase දූෂණය.

විශ්ලේෂණය: Exogenous RNase බෆරයට එකතු වේ;Buffer PW හි වැරදි සේදීමේ ක්‍රියාකාරිත්වය අවශේෂ RNase වලට හේතු වන අතර in vitro transcription වැනි පහල RNA පර්යේෂණාත්මක මෙහෙයුම් වලට බලපානු ඇත.

යෝජනාව: Foregene ශ්‍රේණියේ න්‍යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණ කට්ටලවලට අතිරේක RNase නොමැතිව RNA ඉවත් කළ හැකි අතර, ශාක DNA හුදකලා කට්ටලයේ ඇති සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක සඳහා RNase අවශ්‍ය නොවේ;උපදෙස් අනුව Buffer PW සමඟ පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සේදීමට වග බලා ගන්න, මෙම පියවර මඟ හැරිය නොහැක.

4. එතනෝල් අවශේෂ.

විශ්ලේෂණය: Buffer WB සමඟ පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව සේදීමෙන් පසුව, හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී කිරීමක් සිදු නොකළේය.

නිර්දේශය: නිසි හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී කිරීම සඳහා උපදෙස් අනුගමනය කරන්න.

උපදෙස් අත්පොත:

ශාක DNA හුදකලා කට්ටල උපදෙස් අත්පොත