මැලියම් ප්රතිසාධනය වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා උපදෙස්

1. විද්යුත් විච්ඡේදනය තුළ සාම්පල භාරය වැඩි කරන්න.

2. නැවුම් ලෙස සකස් කරන ලද ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරසිස් බෆරය භාවිතා කරන්න.

3. මැලියම් කපන විට, මැලියම් කැපීමේ පරිමාව අඩු කිරීම සඳහා තීරු සහිත මැලියම් පමණක් කපා ගැනීමට උත්සාහ කරන්න: අරමුණු කොටස් කිහිපයක් සමඟ මැලියම් අවශ්ය නොවේ, එසේ නොමැති නම් එය ප්රකෘති අනුපාතයට බලපානු ඇත.

4. මැලියම් කැබලි දෙකක් හෝ වැඩි ගණනක් උණු කළ පසු, පරිමාව කොපමණ විශාල වුවද නලයක් භාවිතා කර එය එකම තීරුවකට මාරු කරන්න.

5. සෝල් එකට එකතු කරන ලද ද්‍රාවණය තව ටිකක් වැඩි විය හැක, එය DNA පටලයට බන්ධනය වීමට වඩාත් හිතකර නමුත් සාමාන්‍යයෙන් 750ul නොඉක්මවිය යුතුය.

6. ජෙල් ප්‍රතිසාධනය සඳහා යතුර වන්නේ තීරුවේ ඇති ද්‍රාවණයේ ලවණ සාන්ද්‍රණය, ආම්ලිකතාවය (ආරෝපණය) සහ ජලභීතිකාව හරහා තීරුවට DNA බැඳීමයි.එබැවින්, විද්‍යුත් විච්ඡේදක බෆරයේ pH අගය ඉතා වැඩි නම්, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) සෝල් එකට එකතු කළ හැක;පටලය මත DNA අණු වඩා හොඳින් බාධා කිරීම සඳහා, මැලියම් විසුරුවා හැරීමෙන් පසු දියරයට රත් කිරීමට 30% isopropanol එකතු කළ හැකිය.

7. එලියුන්ට් එකතු කිරීමට පෙර, එතනෝල් සම්පූර්ණයෙන්ම වාෂ්ප කිරීම සඳහා මිනිත්තු කිහිපයක් (විනාඩි 10 ක් පමණ) කාමර උෂ්ණත්වයේ තීරුව තබන්න.

8. අවසාන වශයෙන්, ප්‍රතිසාධන පරිමාව අවම කිරීම සඳහා අඩු එලියුන්ට් එකතු කරන්න.සාමාන්‍යයෙන්, 30-50μl ප්‍රවාහය elution සඳහා භාවිතා වේ (ඉතා අඩු නොවේ, එසේ නොමැති නම් එය ඉවත් කිරීමට හිතකර නොවන පටලය තෙත් කිරීමට නොහැකි වනු ඇත);පටලයට බැඳී ඇති DNA සම්පූර්ණයෙන්ම ඉවත් කිරීම සඳහා elution droplets පටලයේ මැද පිහිටා ඇත.

9. ප්‍රවාහය එකතු කිරීමෙන් පසු, එය අංශක 55 ක ජල ස්නානයක විනාඩි 5 ක් ඉවත් කළ හැකිය, නැතහොත් අංශක 50 ක ජල ස්නානයක විනාඩි 10 කට වඩා වැඩි කාලයක් තබා ගත හැකිය, නැතහොත් අංශක 4 ක පැරාෆිල්ම් එකකින් එක රැයකින් මුද්‍රා තබා ඊළඟ දවසේ යථා තත්ත්වයට පත් කිරීම සඳහා කේන්ද්‍රාපසාරී කළ හැකිය.

10. කේන්ද්‍රාපසාරී eluate නැවත adsorption තීරුවට සහ නැවත කේන්ද්‍රාපසාරී එකතු කරන්න.

PCR නිෂ්පාදන ප්රතිසාධනය සඳහා සවිස්තරාත්මක ක්රම සහ ක්රියා පටිපාටි

1. සාමාන්‍ය රබර් ප්‍රතිචක්‍රීකරණය

ඔබට මැලියම් නැවත ලබා ගැනීමට අවශ්ය නම්, එය පහසු සහ තරමක් ඉහළ ප්රතිසාධන අනුපාතයක් ඇති කට්ටලයක් භාවිතා කිරීම වඩාත් සුදුසුය.ඔබට එය අතින් නැවත ලබා ගැනීමට අවශ්‍ය නම්, මැලියම් කැපීමෙන් පසු ඔබට TE පරිමාව මෙන් 3 ගුණයක් එකතු කළ හැකිය.ජල ස්නානයක උණු කිරීමෙන් පසු ෆීනෝල්, ෆීනෝල් ​​/ ක්ලෝරෝෆෝම් පිරිසිදුව නිස්සාරණය කර එතනෝල් අවක්ෂේප කරනු ලැබේ.ඒක තමයි.

2. අඩු ද්රවාංක ජෙල් වලින් DNA ප්රතිසාධනය

DNA කොටස් පිරිසිදු කිරීම ජෙල් පරිමාවට සමාන TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) එකතු කර ජෙල් සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හැරීමට මිනිත්තු 5ක් සඳහා 65 ° C ජල ස්නානයක තබන්න.

එය කාමර උෂ්ණත්වයට ගෙන ආ පසු, සමාන ප්‍රමාණයක ෆීනෝල් ​​ප්‍රමාණයක් (ඉහළ තට්ටුවේ TE, TE සමඟ සංතෘප්ත කර, ෆීනෝල් ​​පහළ ස්ථරය ඉවත් කරන ලදී) එකතු කර, මිශ්‍රණය මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර (මිශ්‍ර කිරීම අවශ්‍ය නොවේ), සහ විනාඩි 3 ක් සඳහා 12,000 rpm හි කේන්ද්‍රාපසාරී කර ඇත.1-2 වතාවක් නැවත නැවත කරන්න.

එතනෝල් වර්ෂාපතනය සිදු කිරීම සඳහා අධි ප්‍රනාටකය ගෙන, 3mol/L සෝඩියම් ඇසිටේට් (pH 5.2) පරිමාව 0.1 ක් සහ නිරපේක්ෂ එතනෝල් පරිමාව 2.5 ගුණයක් එකතු කරන්න.සුදුසු TE ප්‍රමාණයකින් පිරිසිදු කරන ලද DNA ද්‍රාවණය කරන්න, අන්තර්ගතය මැනීමට සහ භාවිතයට සූදානම් කරන්න (එය ඉලක්කගත ජාන ව්‍යුහ විශ්ලේෂණය, පරීක්ෂණ සකස් කිරීම ආදිය සඳහා භාවිතා කළ හැක).

3. හොඳ විස්තාරණ විශේෂත්වයක් සහිත PCR ප්‍රතිසාධනය

PCR වර්ධකයේ විශේෂත්වය හොඳ නම්, එය PCR නිෂ්පාදනයේ සරල පිරිසිදු කිරීමක් සහ ප්‍රතිසාධනයක් පමණි.ඔබට PCR නිෂ්පාදනයට 50ug/ml proteinase K එකතු කළ හැක, 1h සඳහා අංශක 37ක්, phenol/chloroform සමඟ එක් වරක් නිස්සාරණය කරන්න, chloroform සමඟ එක් වරක් නිස්සාරණය කරන්න, සහ supernatant පරිමාව 0.1ක් එකතු කරන්න.සෝඩියම් ඇසිටේට් නිරපේක්ෂ එතනෝල් වෙළුම් 2.5 ක් සමඟ වර්ෂාපතනය මගින් නැවත ලබා ගන්නා ලදී.

ආශ්රිත නිෂ්පාදන:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/