හැදින්වීම:

RNA, විද්‍යාත්මක නාමය ribonucleic acid, එහි කෙටි යෙදුම RiboNucleic Acid වලින් පැමිණේ.

ආර්එන්ඒ ගවේශනය කිරීමේ පදනම වන්නේ දූෂණයෙන් තොර සම්පූර්ණ ආර්එන්ඒ නිස්සාරණය කිරීම වන අතර ආර්එන්ඒ නිස්සාරණයේ මූලික මූලධර්මය දළ වශයෙන් පහත පරිදි සාරාංශ කළ හැක:

1. මුලින්ම සෛල කඩාකප්පල් කරන්න

2. ඉන්පසු සාර්ව අණුක අපද්‍රව්‍ය (ප්‍රෝටීන, ලිපිඩ, DNA, ආදිය) ඉවත් කරන්න.

3. අවසාන වශයෙන්, ලවණ සහ කාබනික ද්‍රාවක ඉවත් කරන අතරම RNA අවක්ෂේප කරනු ලබන අතර, RNA තවදුරටත් පිරිසිදු කරයි.

නිස්සාරණ ක්‍රමයේ අතීතය සහ වර්තමානය

RNA නිස්සාරණයේ පළමු පරම්පරාවේ ක්‍රමය වන්නේ, Piotr Chomczynski නම් සීයා සහ ආච්චි Nicoletta Sacchi විසින් සොයා ගන්නා ලද TRIzol වර්ෂාපතන ක්‍රමය (භාවිතා කරන ප්‍රතික්‍රියාකාරකවලට ගුවානිඩින් අයිසොතියෝසයනේට්, ෆීනෝල්, ක්ලෝරෝෆෝම් යනාදිය ඇතුළත් වේ.) මෙම නව නිපැයුම මගින් RNA නිස්සාරණය ඉක්මනින් හා පහසුවෙන් වර්ධනය වීමට ඉඩ සලසයි.

පසුව සීයා මෙම පේටන්ට් බලපත්‍රය Invitrogen සමාගමට විකුණූ අතර Invitrogen මෙම ක්‍රමය ලොවට ප්‍රචලිත කළ අතර එය බහුලව භාවිතා වන ක්‍රමයක් බවට පත්විය.

පසුව, Invitrogen Thermo විසින් අත්පත් කර ගන්නා ලදී!

නියෝජිත නිෂ්පාදනය: Invitrogen හි TRIzol ප්රතික්රියාකාරකය

කෙසේ වෙතත්, TRIzol වර්ෂාපතන ක්‍රමයට බහු වර්ෂාපතනයක් සහ RNA නිස්සාරණය අවශ්‍ය වන අතර, භාවිතා කරන ප්‍රතික්‍රියාකාරක විෂ සහිත වන අතර ක්‍රියාත්මක වීමට බොහෝ කාලයක් ගතවේ.

එබැවින්, දෙවන පරම්පරාවේ තීරු-එන්සයිම පිරිපහදු කිරීමේ ක්‍රමය ඇති වූ අතර, අනෙකුත් අපද්‍රව්‍ය ඉවත් කරන අතරම නියැදියේ RNA ප්‍රතිසාධනය උපරිම කිරීම සඳහා විශේෂිත න්‍යෂ්ටික අම්ල අවශෝෂණ ද්‍රව්‍යයක් ලෙස සිලිකා ජෙල් පටලය භාවිතා කරයි.

දෙවන පරම්පරාවේ ක්‍රමය ස්ථායී ක්‍රියාකාරීත්වයේ පදනම මත මෙහෙයුම සරල කරයි, අවදානම් සාධකය අඩු කරයි, සහ RNA නිස්සාරණයේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කරයි.

නියෝජිත නිෂ්පාදන: QIAGEN RNeasy සහ බොහෝ දේශීය නිෂ්පාදන

කෙසේ වෙතත්, පළමු සහ දෙවන පරම්පරාවේ ක්‍රම දෙකටම DNA දූෂණය ඉවත් කිරීම සඳහා DNase භාවිතා කිරීම අවශ්‍ය වන අතර, එය පසුකාලීන පහළ පරීක්ෂණ සඳහා යම් අපහසුතාවයක් ගෙන දෙයි.Residual DNase ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව අඩු කරන අතර ප්‍රථම තන්තු cDNA සංශ්ලේෂණය අඩු කරයි, එමගින් ප්‍රතිඵලවල නිරවද්‍යතාවයට බලපායි.

එබැවින්, තුන්වන පරම්පරාවේ නිස්සාරණය කිරීමේ ක්රමය දෙවන පරම්පරාවේ පදනම මත ප්රශස්ත වේ.පරීක්ෂණයට එන්සයිම එකතු කිරීමට අවශ්‍ය නොවන අතර RNA පහසුවෙන් ලබා ගත හැක්කේ තීරු දෙකකින් පමණි.

1 තීරුව: DNA පිරිසිදු කිරීම සඳහා DNA පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව

තීරුව 2: RNA-පමණක් තීරුව විශේෂයෙන් RNA අවශෝෂණය කර ප්‍රතිසාධනය කරයි

එවැනි සරල මෙහෙයුමක් කාලය ඉතිරි කරනවා පමණක් නොව, පහළ මට්ටමේ අත්හදා බැලීම් ක්රියාත්මක කිරීමටද පහසුකම් සපයයි!

නියෝජිත නිෂ්පාදන: QIAGEN RNeasy Plus සහපෙරනිමිතිRNA පිරිසිදු කිරීමේ මාලාවේ නිෂ්පාදන

(RNeasy Plus)

(Foregene ගේශාක සම්පූර්ණ RNA හුදකලා කට්ටලය)

ඔබට නිහඬව කියන්න!Foregene's RNA කට්ටලය, මිනිස් සිරුරට කිසිදු විෂ ද්‍රව්‍යයක් එකතු නොකර, ඝන පෘෂ්ඨයේ ඇති RNase 400μg සම්පූර්ණයෙන් විනාඩි 1කින් ඉවත් කළ හැකි, භාවිතයට පහසු RNase Eraser එකක් ද ඉදිරිපත් කරයි!

පින්තූරය1: මෙහෙයුම් ක්‍රියාවලි සංසන්දන සටහන

Foregene's නිෂ්පාදනවලට ගීත දෙකකින් පමණක් RNA නිස්සාරණය සම්පූර්ණ කළ හැක, ඔබේ අත්හදා බැලීමේ ප්‍රගතිය ගැන අන් අය ඊර්ෂ්‍යා නොකරන්න!

පින්තූරය2:Eපර්යේෂණාත්මක ප්රතිඵල සංසන්දනාත්මක සටහන

පළමු පරම්පරාව (1: TRIzol)

දෙවන පරම්පරාව (2: QIAGEN හි RNeasy)

තුන්වන පරම්පරාව (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

පින්තූරය3: qPCR ප්‍රස්ථාරය (විස්තාරණ වක්‍ර ප්‍රස්ථාරය)

පළමු පරම්පරාව (කොළ යනු TRIzol -, රතු යනු TRIzol +)

දෙවන පරම්පරාව (අහස නිල් යනු QIAGEN RNeasy-, රතු යනු QIAGEN RNeasy +)

තුන්වන පරම්පරාව (නිල් යනු QIAGEN RNeasy plus, කොළ යනු Foregene)

(සටහන: qPCR ප්‍රස්ථාරය “-” මගින් පෙන්නුම් කරන්නේ DNase එකතු කර නොමැති අතර DNA දූෂණය ඉවත් කර නොමැති බවයි. එබැවින්, CT වැඩි වන අතර ප්‍රති result ලය නිවැරදි නොවේ; “+” මඟින් DNase එකතු කර ඇති අතර DNA දූෂණය ඉවත් කර ඇති බව පෙන්නුම් කරයි, ප්‍රතිඵලය නිවැරදියි)

සෑම තාක්ෂණික උත්ශ්‍රේණි කිරීමකින්ම අදහස් වන්නේ අත්හදා බැලීමේ ක්‍රියාකාරිත්වය සරල සහ වඩාත් පරිශීලක-හිතකාමී දිශාවකින් වර්ධනය වන බවයි.

Foregene තවත් විද්‍යාත්මක පර්යේෂකයන්ට පර්යේෂණාත්මක කාලය සහ පිරිවැය ඉතිරි කර ගැනීමට, උසස් තත්ත්වයේ පර්යේෂණාත්මක ප්‍රතිඵල ලබා ගැනීමට සහ ඒකාබද්ධව වඩා වටිනා විද්‍යාත්මක පර්යේෂණ ජයග්‍රහණ නිර්මාණය කිරීමට උපකාර කිරීම අරමුණු කරයි.