කර්තෘ: වැන්ග් ෂියාඕයන්, ෂාඕ එරියු

ඒකකය: Jiaozhou රෝහල, Dongfang රෝහල Tongji විශ්වවිද්‍යාලයට අනුබද්ධිතයි

වර්තමානයේ, ශ්වසන රෝග කාරක න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීම සඳහා ප්රධාන නියැදි වර්ගය උගුරේ තුවාලය වේ.බහුලව භාවිතා වන සාම්පල සංරක්ෂණ විසඳුම් වර්ග බොහොමයක් ඇත, ඒවා සියල්ලම ප්රවාහනය සහ ගබඩා කිරීම සඳහා ශීතකරණය හෝ ශීත කළ යුතුය;එකතු කිරීමේ සහ ප්‍රවාහන ක්‍රියාවලියේදී අඩු උෂ්ණත්වයේ සම්පූර්ණ ක්‍රියාවලිය පාලනය කිරීම අපහසු වන අතර නියැදි පරීක්ෂාවට පෙර තත්ත්ව පාලනය සහතික කිරීම අපහසු වේ.^[1-2].

RNase (RNase) යනු ආර්එන්ඒ ජල විච්ඡේදනය කරන අන්තරාසර්ගයකි, ප්‍රධාන වශයෙන් නියුක්ලියෝටයිඩ අතර ෆොස්ෆොඩීස්ටර් බන්ධන වෙන් කරයි.RNase අණුව ඉතා ස්ථායී වන අතර, ව්‍යුහය තුළ ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන පවතින අතර, එහි ක්‍රියාකාරීත්වයට divalent කැටායන තිබීම අවශ්‍ය නොවේ, එබැවින් RNase පහසුවෙන් denatured නොවන අතර, අධික උෂ්ණත්වයෙන් පසුව හෝ denaturants භාවිතයෙන් පසුව පවා එය නැවත ලබා ගැනීම පහසුය.RNases අන්තරාසර්ග සහ බාහිර ඒවාට බෙදා ඇත.සෛල පුපුරා යන විට එන්ඩොජෙනස් RNases එකවරම මුදා හැරිය හැක.එබැවින්, ආවේණික RNases වල භූමිකාව ඉවත් කිරීම RNA නිස්සාරණය කිරීමේ ක්‍රියාවලියේ ඉතා තීරණාත්මක පියවරකි.බාහිර RNases පුළුල් ලෙස බෙදා හරිනු ලැබේ.RNases වාතයේ, මිනිස් සමෙහි, හිසකෙස්වල සහ කෙල වල පවතින අතර, RNA පහසුවෙන් ක්ෂය වීමට වැදගත් හේතු වේ.^[3].

දත්ත විමසුම

CANS-CL02-A009 තාක්ෂණික අවශ්‍යතා තුළ “වෛද්‍ය රසායනාගාර තත්ත්ව සහ නිපුණතා ප්‍රතීතන මාර්ගෝපදේශ යෙදීම” යෙදුමට අනුව සුදුසු ජල තත්ත්ව ප්‍රමිතීන් සකස් කළ යුතු බව යෝජනා කරයි;ඉවත දැමිය හැකි වාතය රහිත බහාලුම්:

RNase/වර්ගීකරණය

(1) ආර්නාස් ඒ

රයිබොනියුක්ලීස් A (RNase A), ගව අග්න්‍යාශයෙන් ව්‍යුත්පන්න වූ එන්ඩොරිබොනියුක්ලීස් වන අතර එය RNA මත ඇති පිරමිඩීන් අපද්‍රව්‍යවල 3′ අන්තයට ප්‍රහාර එල්ල කළ හැකි අතර යාබද නියුක්ලියෝටයිඩ මගින් සාදනු ලබන සයිටොසීන් හෝ යුරේසිල් කපා දමයි.ෆොස්ෆොඩීස්ටර් බන්ධනය, ප්‍රතික්‍රියාවේ අවසාන නිෂ්පාදනය 3′ පිරමිඩීන් නියුක්ලියෝටයිඩයක් සහ අවසානයේ 3′ පිරමිඩීන් නියුක්ලියෝටයිඩයක් සහිත ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩයකි.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae වලින් ව්‍යුත්පන්න වී ඇත, එය විශේෂයෙන් ගුවානීන්හි 3′-පර්යන්ත පොස්පේට් මත ක්‍රියා කරයි, සහ බෙදීමේ ස්ථානය ගුවානීන්හි 3′ පොස්පේට් සහ යාබද නියුක්ලියෝටයිඩවල 5′ හයිඩ්‍රොක්සයිල් අතර වේ.ප්‍රතික්‍රියාවේ අවසාන ඵලය වන්නේ 3′guanylic අම්ලය සහ oligonucleotide කොටස් 3′guanylic අම්ලය අවසානයේය.

(3) ආර්නාස් එච්

Ribonuclease H (RNase H) මුලින්ම සොයාගනු ලැබුවේ වසු පැටවාගේ තයිමස් පටක වලින් වන අතර එහි කේතීකරණ ජානය Escherichia coli බවට ක්ලෝන කර ඇත.එයට DNA විශේෂයෙන් පිරිහීමට හැකිය: RNA දෙමුහුන් ද්විත්ව වල RNA නූල්, 3′-OH සහ 5′-monophosphate අන්ත සහිත ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ සහ මොනොනියුක්ලියෝටයිඩ ඇති කරයි, එයට තනි හෝ ද්විත්ව නූල් සහිත DNA හෝ RNA පිරිහීමට නොහැකිය.

RNase

කාර්යය සහ භාවිතය

රයිබොනියුක්ලීස් මගින් රයිබොනියුක්ලික් අම්ලය (RNA) ක්ෂය වීම උත්ප්‍රේරණය කළ හැකි අතර කෘතිමව සංස්ලේෂණය කළ හැක.ඖෂධීය ආලේපන කම්පන සහ සන්ධි වේදනාව සඳහා දේශීයව භාවිතා වේ.වාර්තා වලට අනුව, රයිබොනියුක්ලීස් මගින් ධාරක සෛල පරිවෘත්තීය වෙනස් කළ හැකිය, වෛරස් සංස්ලේෂණය වළක්වයි, ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා වෛරසය ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා වෛරසය පැතිරීම වළක්වයි, සහ කුකුල් කළලවල එන්නත් සහ හර්පීස් වෛරසය සෑදීම වළක්වයි.රයිබොනියුක්ලීස් දෛනික අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් 180 mg සායනික භාවිතය, වසංගත එන්සෙෆලයිටිස් ප්‍රතිකාර සඳහා ප්‍රයෝජනවත් වේ, රයිබොනියුක්ලීස් රයිබොනියුක්ලික් අම්ලයේ (RNA) ක්ෂය වීම උත්ප්‍රේරණය කළ හැකි අතර දැන් එය කෘතිමව සංස්ලේෂණය කළ හැකිය.ඖෂධීය ආලේපන කම්පන සහ සන්ධි වේදනාව සඳහා දේශීයව භාවිතා වේ.වාර්තා වලට අනුව, රයිබොනියුක්ලීස් මගින් ධාරක සෛල පරිවෘත්තීය වෙනස් කළ හැකිය, වෛරස් සංස්ලේෂණය වළක්වයි, ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා වෛරසය ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා වෛරසය පැතිරීම වළක්වයි, සහ කුකුල් කළලවල එන්නත් සහ හර්පීස් වෛරසය සෑදීම වළක්වයි.රයිබොනියුක්ලීස් දෛනික අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් 180 mg සායනික භාවිතය වසංගත එන්සෙෆලයිටිස් ප්‍රතිකාර සඳහා ප්‍රයෝජනවත් වේ.

RNase

නිෂේධක අර්ථ දැක්වීම

RNase inhibitor ඒකකයේ නිර්වචනය: 5ng RNase A හි ක්‍රියාකාරිත්වයෙන් 50% ක් නිෂේධනය කිරීමට අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය එක් ඒකකයකි.

RNase Inhibitors ක්‍රියා කරන ආකාරය

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate යනු C2H6N4S අණුක සූත්‍රය සහිත කාබනික සංයෝගයකි.ජීව විද්‍යාත්මක වෛද්‍ය විද්‍යාව, රසායනික ප්‍රතික්‍රියාකාරක ආදියෙහි ප්‍රධාන වශයෙන් භාවිතා වේ. Guanidine isothiocyanate යනු ප්‍රෝටීන් ලයිසින් කාරකයක් වන අතර, එය බොහෝ විට අණුක රෝග විනිශ්චය ප්‍රතික්‍රියාකාරකවල ලයිසිස් ද්‍රාවණයේ ප්‍රධාන සංරචකය ලෙස භාවිතා කරයි.එය පටක ලයිස් කිරීමට, සෛල ව්‍යුහය විනාශ කිරීමට සහ නියුක්ලියෝප්‍රෝටීන් වලින් න්‍යෂ්ටික අම්ලය විඝටනය කළ හැකි අතර, RNase වෙත ප්‍රබල අවපාතයක් ඇත.එය දැනට වඩාත් ඵලදායී RNase inhibitor වේ.

TRIzol යනු සෛල හෝ පටක වලින් සම්පූර්ණ RNA නිස්සාරණය කළ හැකි නව සම්පූර්ණ RNA නිස්සාරණ ප්‍රතික්‍රියාකාරකයකි.එහි phenol සහ guanidine isothiocyanate වැනි ද්‍රව්‍ය අඩංගු වන අතර එමඟින් සෛල වේගයෙන් කඩාකප්පල් කළ හැකි අතර සෛල මගින් නිකුත් කරන න්‍යෂ්ටිය වළක්වයි.

(කෙසේ වෙතත්, ගුවානිඩින් අයිසොතියෝසයනේට් රසායනාගාර පර්යේෂකයන්ගේ සෞඛ්‍යයට භයානක ය.)

RNasin:

මීයන්ගේ අක්මාව හෝ මිනිස් බ්ලාස්ටෝඩර්ම් වලින් ලබාගත් අම්ල ග්ලයිකොප්‍රෝටීන.Rnasin යනු RNase හි තරඟකාරී නොවන නිෂේධකයක් වන අතර එමඟින් ඒවා අක්‍රිය කිරීමට විවිධ RNases සමඟ බැඳිය හැක.

(වැඩිදුර විස්තර:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hඅධික උෂ්ණත්වය:

අධික උෂ්ණත්වය ද ප්‍රෝටීන් නිරුද්ධ කිරීමේ පොදු මාධ්‍යයකි.

ඩයිඑතිල්පිරොකාබනේට් (DEPC):

DEPC යනු ශක්තිමත් නමුත් අසම්පූර්ණ RNase inhibitor එකක් වන අතර, RNase ක්‍රියාකාරී කාණ්ඩයේ ඇමයිනෝ අම්ල imidazole මුදුව සමඟ ප්‍රෝටීන ප්‍රතිනිර්මාණය කිරීම සඳහා ඒකාබද්ධ කිරීමෙන් RNase ක්‍රියාකාරකම් වලක්වා ගත හැක.

Vanadyl ribonucleoside සංකීර්ණය:

වැනේඩියම් ඔක්සයිඩ් අයන සහ නියුක්ලියෝසයිඩ් මගින් සාදන ලද සංකීර්ණයක්, සංක්‍රාන්ති ද්‍රව්‍ය ස්වරූපයෙන් RNase හා බන්ධනය වන අතර එමඟින් RNase හි ක්‍රියාකාරිත්වය සම්පූර්ණයෙන්ම පාහේ වළක්වයි.

අනික්:

SDS, යූරියා, diatomaceous earth, ආදිය ද RNase මත යම් නිෂේධනීය බලපෑමක් ඇති කරයි.

විශේෂඥ සමාලෝචන

Li Yujie ප්රධාන කාර්මික ශිල්පියා

රසායනාගාර දෙපාර්තමේන්තුවේ අධ්‍යක්ෂ, Jiaozhou රෝහල, Dongfang රෝහල Tongji විශ්ව විද්‍යාලයට අනුබද්ධිත

බාහිර RNase ජෛව හායනය වැලැක්වීම සඳහා, RNA නිස්සාරණය කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී නිතර වෙස් මුහුණු, අත්වැසුම් සහ තොප්පි පැළඳිය යුතුය.සියලුම වීදුරු භාණ්ඩ වියළන උඳුනක 200 ° C දී පැය 2 කට වඩා වැඩි කාලයක් පුළුස්සනු ලැබේ.ප්ලාස්ටික් වැනි ෙබ්කිං සඳහා භාවිතා කරන ද්රව්ය, DEPC ජලය සමඟ ප්රතිකාර කළ යුතු අතර, පසුව ආස්රැත ජලයෙන් සෝදාගත යුතුය.RNA නිස්සාරණය, සංරක්ෂණය සහ හඳුනාගැනීම සඳහා භාවිතා කරන ප්‍රතික්‍රියාකාරක හෝ උපාංග RNA සඳහා කැප කළ යුතු අතර ස්වාධීන RNA මෙහෙයුම් ප්‍රදේශයක් පිහිටුවිය යුතුය.

යොමු:

[1] Smith-Voughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.ආදිවාසී ඕස්ට්‍රේලියානු ළමුන්ගේ උග්‍ර පහළ ශ්වසන ආසාදන ආරම්භ වීමට පෙර නාසෝෆරින්ක්ස් හි බැක්ටීරියා සහ වෛරස්[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] චීන නිවාරණ ඖෂධ ​​සංගමයේ රෝහල් ආසාදන පාලන ශාඛාව.සායනික ක්ෂුද්ර ජීවී නිදර්ශක එකතු කිරීම සහ පරීක්ෂා කිරීම සඳහා මාර්ගෝපදේශ [J].රෝහල් ආසාදන පිළිබඳ චීන සඟරාව, 2018(20):3192-3200.

[3] “සායනික පරීක්ෂණ දස දහසක් ඇයි අණුක ජීව විද්‍යා පරීක්ෂණ පරිමාව”