PCR ප්‍රතික්‍රියා සිදු කිරීමේදී සෑම කෙනෙකුටම එවැනි හෝ එවැනි ගැටළු වලට මුහුණ දීමට සිදුවනු ඇතැයි මම විශ්වාස කරමි, නමුත් ඒවායින් බොහොමයක් ප්‍රධාන ගැටළු දෙකකට වර්ග කළ හැකිය:

ජාන සැකිල්ලේ ඉතා කුඩා විස්තාරණය (විස්තාරණය);
ඉලක්ක නොවන ජාන විස්තාරණය ඕනෑවට වඩා.
ආකලන භාවිතා කිරීම මෙම ගැටළු විසඳීම සඳහා පොදු උපාය මාර්ගයකි.සාමාන්යයෙන් ආකලනවල කාර්යභාරය පැති දෙකක් ඇත:
ද්විතියික ව්යුහයජානවල (ද්විතියික ව්යුහය);
විශේෂිත නොවන ප්‍රාථමිකකරණය අඩු කරන්න.
අද, සංස්කාරක විසින් PCR ප්‍රතික්‍රියා වල ඇති පොදු ආකලන සහ ඒවායේ ක්‍රියාකාරිත්වය කෙටියෙන් ඔබට හඳුන්වා දෙනු ඇත.
ද්විතියික ව්යුහය අඩු කරන අතිෙර්ක
සල්ෆොක්සයිඩ්(DMSO)
ජාන සාම්පලඉහළ GC අන්තර්ගතයක් සමඟ.කෙසේ වෙතත්, DMSO ද Taq පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරිත්වය බෙහෙවින් අඩු කරයි.එමනිසා, සෑම කෙනෙකුටම පොලිමරේස් හි අච්චු ප්‍රවේශ්‍යතාව සහ ක්‍රියාකාරිත්වය සමතුලිත කළ යුතුය.2% සිට 10% දක්වා DSMO හි විවිධ සාන්ද්‍රණයන් උත්සාහ කළ හැකි බව සංස්කාරක යෝජනා කරයි.
අයනික නොවන ඩිටර්ජන්ට්
0.1-1% ට්‍රයිටන් X-100, Tween 20 හෝ NP-40 වැනි අයනික නොවන ඩිටර්ජන්ට් සාමාන්‍යයෙන් DNA ද්විතියික ව්‍යුහය අඩු කරයි.මෙය අච්චු ජානයේ විස්තාරණය වැඩි කළ හැකි වුවද, එය විශේෂිත නොවන විස්තාරණයේ කරදර ඇති කරයි.එබැවින්, මෙම ආකලන සුන්බුන් නොමැතිව අඩු අස්වැන්නක් සහිත PCR ප්‍රතික්‍රියා සඳහා හොඳින් ක්‍රියා කරයි, නමුත් සාපේක්ෂව අපිරිසිදු PRC ප්‍රතික්‍රියා සඳහා එතරම් හොඳ නොවේ.අයනික නොවන ඩිටර්ජන්ට් වල තවත් වාසියක් වන්නේ SDS දූෂණය අඩු කිරීමයි.සාමාන්‍යයෙන් DNA නිස්සාරණ ක්‍රියාවලියේදී, SDS PCR පියවරට ගෙන එනු ඇත, එය පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරිත්වය බෙහෙවින් වළක්වයි.එබැවින්, ප්රතික්රියාවට 0.5% Tween-20 හෝ Tween-40 එකතු කිරීම SDS හි ඍණාත්මක බලපෑම් උදාසීන කළ හැකිය.
බීටයින්_
ද්විතියික ව්‍යුහය සෑදීම අඩු කිරීමෙන් බීටයින් DNA විස්තාරණය වැඩි දියුණු කළ හැකි අතර එය සාමාන්‍යයෙන් වාණිජ PCR කට්ටලවලට “අභිරහස්” එකතු කිරීමකි.ඔබට betaine භාවිතා කිරීමට අවශ්‍ය නම්, ඔබ betaine හෝ betaine mono-hydrate (Betaine හෝ Betaine mono-hydrate) දැමිය යුතුය, නමුත් betaine hydrochloride (Betaine HCl) නොව, අවසාන සාන්ද්‍රණය 1-1.7M දක්වා සකස් කරන්න.ඩීඑන්ඒ දියවීම/ඩීඑන්ඒ අවප්‍රමාණය වීමේ මූලික යුගල සංයුතිය මත යැපීම ඉවත් කරන නිසා බීටයින් විශේෂත්වය වැඩි දියුණු කිරීමට ද උපකාරී වේ.
විශේෂිත නොවන ප්‍රාථමිකකරණය අඩු කිරීමට ආකලන
ෆෝමමයිඩ්
Formamide යනු බහුලව භාවිතා වන කාබනික PCR ආකලනයකි.එය DNA වල ප්‍රධාන වලක් සහ කුඩා වලක් සමඟ ඒකාබද්ධ විය හැකි අතර එමඟින් ප්‍රධාන DNA ද්විත්ව හෙලික්සයේ ස්ථායීතාවය අඩු කර DNA වල දියවන උෂ්ණත්වය අඩු කරයි.PCR පරීක්ෂණවලදී භාවිතා කරන ෆෝමයිඩ් සාන්ද්‍රණය සාමාන්‍යයෙන් 1%-5% වේ.
ටෙට්රාමෙතිල්ඇමෝනියම් ක්ලෝරයිඩ්( TMAC)
ටෙට්‍රමෙතිලමෝනියම් ක්ලෝරයිඩ් දෙමුහුන්කරණයේ විශේෂත්වය (දෙමුහුම් විශේෂත්වය) වැඩි කළ හැකි අතර DNA ද්‍රවාංක උෂ්ණත්වය වැඩි කරයි.මේ අනුව, TMAC හට නිශ්චිත නොවන ප්‍රාථමික ඉවත් කළ හැකි අතර DNA සහ RNA වැරදි ලෙස බන්ධනය වීම අඩු කරයි.ඔබ භාවිතා කරන්නේ නම්පිරිහුණු ප්‍රයිමර්PCR ප්‍රතික්‍රියාවේදී, 15-100mM සාන්ද්‍රණයකදී බහුලව භාවිතා වන TMAC එකතු කිරීමට මතක තබා ගන්න.
වෙනත් පොදු ආකලන
ඉහත සඳහන් කළ ආකලන කාණ්ඩ දෙකට අමතරව, PCR ප්‍රතික්‍රියා වල බොහෝ පොදු ආකලන ඇත, ඒවාට විවිධ කාර්යයන් තිබුණද, ඒවා ද ඉතා වැදගත් වේ.
මැග්නීසියම් අයන
මැග්නීසියම් අයන යනු පොලිමරේස් වල අත්‍යවශ්‍ය කෝෆැක්ටර් (කොෆැක්ටර්) වේ, එනම් මැග්නීසියම් අයන නොමැතිව පොලිමරේස් අක්‍රිය වේ.කෙසේ වෙතත්, වැඩිපුර මැග්නීසියම් අයන පොලිමරේස් වල කාර්යක්ෂමතාවයට ද බලපායි.එක් එක් PCR ප්රතික්රියාවේ මැග්නීසියම් අයන සාන්ද්රණය වෙනස් වේ.Chelating කාරක (EDTA හෝ citrate වැනි), dNTPs සහ ප්‍රෝටීන වල සාන්ද්‍රණය සියල්ල මැග්නීසියම් අයන සාන්ද්‍රණයට බලපායි.එබැවින්, ඔබේ PCR අත්හදා බැලීමේ ගැටළු තිබේ නම්, ඔබට විවිධ මැග්නීසියම් අයන සාන්ද්‍රණයන් වෙනස් කිරීමට උත්සාහ කළ හැකිය, උදාහරණයක් ලෙස, 1.0 සිට 4.0mM දක්වා, අතර පරතරය 0.5-1mM.
මැග්නීසියම් ක්ලෝරයිඩ් ද්‍රාවණයේ සාන්ද්‍රණ ස්තරීකරණයට බහු කැටි දියවන චක්‍ර හේතු විය හැකි බව සඳහන් කිරීම වටී.එමනිසා, ඔබ එක් එක් භාවිතයට පෙර එය සම්පූර්ණයෙන්ම විසුරුවා හැර, එය භාවිතා කිරීමට පෙර එය හොඳින් මිශ්ර කළ යුතුය.
Bovine serum albumin(Bovine albumin, BSA)
අණුක රසායන විද්‍යා අත්හදා බැලීම් වලදී, විශේෂයෙන් සීමා කිරීම් එන්සයිම ජීර්ණය සහ PCR පරීක්ෂණ වලදී, bovine serum albumin ඉතා සුලභ ආකලනයකි.PCR ප්‍රතික්‍රියා වලදී, ෆීනෝලික් සංයෝග වැනි අපවිත්‍ර ද්‍රව්‍ය අඩු කිරීමට BSA උපකාරී වේ.තවද පරීක්ෂණ නළයේ බිත්තියට ප්‍රතික්‍රියාකාරක ඇලවීම අඩු කළ හැකි බව ද පැවසේ.PCR ප්‍රතික්‍රියාවේදී, සාමාන්‍යයෙන් එකතු කරන ලද BSA සාන්ද්‍රණය 0.8 mg/ml දක්වා ළඟා විය හැක.
 
ආශ්රිත නිෂ්පාදන:
PCR වීරයා(සායම් සහිත)
PCR වීරයා