සෘජු PCR යනු න්යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණයකින් තොරව විස්තාරණය කිරීම සඳහා සත්ව හෝ ශාක පටක සෘජුවම භාවිතා කරන ප්රතික්රියාවකි.බොහෝ ආකාරවලින්, සෘජු PCR සාමාන්‍ය PCR මෙන් ක්‍රියා කරයි

ප්‍රධාන වෙනස වන්නේ සෘජු PCR හි භාවිතා කරන අභිරුචි බෆරයයි, නියැදිය න්‍යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණයකින් තොරව PCR ප්‍රතික්‍රියාවට සෘජුවම යටත් කළ හැක, නමුත් එන්සයිම වල ඉවසීම සහ සෘජු PCR ප්‍රතික්‍රියාවට සම්බන්ධ බෆරයේ ගැළපුම සඳහා අනුරූප අවශ්‍යතා ඇත.

සාමාන්‍ය සාම්පලවල PCR නිෂේධක වැඩි හෝ අඩු වුවද, එන්සයිම සහ බෆර වල ක්‍රියාකාරිත්වය යටතේ සෘජු PCR තවමත් විශ්වාසනීය විස්තාරණයක් ලබා ගත හැක.සාම්ප්‍රදායික PCR ප්‍රතික්‍රියාව සඳහා අච්චුවක් ලෙස උසස් තත්ත්වයේ න්‍යෂ්ටික අම්ලයක් අවශ්‍ය වන අතර, එම අච්චුවේ ප්‍රෝටීන් සහ අනෙකුත් අපද්‍රව්‍ය අඩංගු නම් PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ සුමට ප්‍රගතිය වළක්වයි.Direct PCR දැනට අණුක රෝග විනිශ්චය ක්ෂේත්‍රයේ වඩාත් ජනප්‍රිය තාක්ෂණයකි.

01 Direct PCR මුලින් භාවිතා කළේ සතුන් සහ ශාක සඳහා ය

සෘජු PCR හි මුල්ම යෙදුම වන්නේ ප්‍රවේණිගත කිරීම, සංක්‍රාන්ති, ප්ලාස්මිඩ් හඳුනාගැනීම, ජාන knockout විශ්ලේෂණය, DNA මූලාශ්‍ර හඳුනාගැනීම සහ වෙනත් ක්ෂේත්‍ර NP හඳුනාගැනීම් අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන මීයන්, බළලා, කුකුල් මස්, හාවා, බැටළුවන්, ගවයන්, වැනි සතුන්ගේ සහ ශාකවල ලේ, පටක සහ හිසකෙස්, ශාක පත්‍ර සහ බීජ ආදියයි.

මෙම ක්ෂේත්‍රවල සමහර පොදු ලක්ෂණ ඇත, එනම් ඉලක්කගත ජාන අන්තර්ගතය සාපේක්ෂව ඉහළ වන අතර න්‍යෂ්ටික අම්ල නිස්සාරණය කරදරකාරී වේ, එබැවින් සෘජු PCR මඟින් කාලය ඉතිරි කර ගැනීම සහ ප්‍රතිඵල මත සුළු බලපෑමක් ඇති කිරීම පමණක් නොව පිරිවැයද ඉතිරි කර ගත හැකිය.

රෝග කාරක හඳුනා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරන සෘජු PCR මෑත වසරවල කාරණයකි, සමහර PCR ප්රතික්රියාකාරක නිෂ්පාදකයින් නවෝත්පාදන සිදු කිරීමේදී මෙම දිශාවට බොහෝ උත්සාහයන් ගෙන ඇත.විශේෂයෙන්ම මෙම COVID-19 වසංගතය තුළ, මානව-SARS nucleic-Acids nuclear-coclev හි තත්‍ය කාලීන RT PCR තාක්‍ෂණය (rRT-PCR) භාවිතා කරන Foregene විසින් පර්යේෂණය කර සංවර්ධනය කරන ලද SARS-CoV-2 Nucleic Acid Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) වැනි එවැනි හඳුනාගැනීමේ නිෂ්පාදන බොහොමයක් වෙළඳපොලේ දර්ශනය වී ඇත. හෝ oropharyngeal swab සාම්පල.

Foregene යනු සාමාන්‍ය ORF1ab, N, E, සහ හඳුනාගැනීම සඳහා Direct PCR තාක්ෂණය භාවිතා කරන සමාගම්වලින් එකකි.ප්රභේද්යයක් SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) සහ P.1 lineage (BR) වැනි මානව නාසෝෆරින්ජියල් හෝ ඕරොෆරින්ජියල් ස්පුබ් සාම්පලවල ඇති න්‍යෂ්ටික අම්ල පෙළ.

02  සෘජු PCR සඳහා අවශ්ය ප්රතික්රියාකාරක

සාම්පල ලයිසෙට්

නියැදි ලයිසේට් ඔබ විසින්ම වින්‍යාසගත කර හෝ මිලදී ගත හැක.ලයිසේට් විවිධ වෙළඳ නාමවල සංයුතියේ වෙනස ලයිසිං හැකියාව වෙනස් කරයි, පසුව ලයිසිං කාලය තරමක් වෙනස් වේ.උදාහරණයක් ලෙස, සත්ව පටක සාම්පල සකස් කිරීම සඳහා, සාමාන්යයෙන් විනාඩි 30 ක් හෝ රාත්රී ලයිසිස් නිර්දේශ කරනු ලබන අතර, වෛරස් සඳහා ලයිසිස් විසඳුම විනාඩි 3-10 දක්වා පරාසයක පවතී.

PCR ප්රධාන මිශ්රණය

විශේෂිත විස්තාරණය වැඩි දියුණු කිරීම සහ විස්තාරණ හැකියාව වැඩි කිරීම සඳහා උණුසුම්-ආරම්භක DNA පොලිමරේස් භාවිතා කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.සෘජු PCR හි හරය ඉතා ඉවසිය හැකි පොලිමරේස් වේ.

DNA වර්ධකයට බලපාන නියැදියේ ඇති සංරචක ඉවත් කිරීම හෝ නිෂේධනය කිරීම

නියැදිය ලයිසේට් සමඟ සැකසූ පසු, ප්‍රෝටීන, ලිපිඩ සහ අනෙකුත් සෛල සුන්බුන් මුදා හරිනු ඇත, මෙම ද්‍රව්‍ය PCR ප්‍රතික්‍රියාව වළක්වයි.එබැවින් සෘජු PCR මෙම සාධකවල බලපෑම අඩු කිරීම සඳහා අනුරූප ඉවත් කිරීම හෝ නිෂේධක එකතු කිරීම අවශ්ය වේ.

03  සෘජු PCR දැනුම ලක්ෂ්‍ය පහක එකතුවකි

පළමුව, සෘජු PCR තාක්ෂණය යනු විවිධ ජීව විද්‍යාත්මක සාම්පල සඳහා සෘජු PCR තාක්ෂණයකි.මෙම තාක්ෂණික තත්ත්වය යටතේ, නියුක්ලෙයික් අම්ලය වෙන් කර නිස්සාරණය කිරීම, පටක සාම්පලය වස්තුව ලෙස සෘජුවම භාවිතා කිරීම සහ PCR ප්‍රතික්‍රියාව සිදු කිරීම සඳහා ඉලක්කගත ජාන ප්‍රාථමික එකතු කිරීම අවශ්‍ය නොවේ.

දෙවනුව, සෘජු PCR තාක්‍ෂණය සම්ප්‍රදායික DNA අච්චු විස්තාරණ තාක්‍ෂණයක් පමණක් නොව, RNA අච්චු ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ PCR ද ඇතුළත් වේ.

තෙවනුව, Direct PCR තාක්‍ෂණය මගින් පටක සාම්පල මත සාමාන්‍ය ගුණාත්මක PCR ප්‍රතික්‍රියා සෘජුවම සිදු කරනවා පමණක් නොව, Real-Time qPCR ප්‍රතික්‍රියා ද ඇතුළත් වේ, ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියට ප්‍රබල පසුබිම් විරෝධී ප්‍රතිදීප්ත මැදිහත්වීමේ හැකියාවක් අවශ්‍ය වන අතර අන්තරාසර්ග ප්‍රතිදීප්තතාව ප්‍රතිවිරෝධක හැකියාව නිවා දමයි.

හතරවනුව, සෘජු PCR තාක්ෂණය මගින් ඉලක්ක කරන ලද සාම්පල සඳහා නියුක්ලෙයික් අම්ල සැකිලි මුදා හැරීම පමණක් අවශ්‍ය වන අතර PCR ප්‍රතික්‍රියාවට බාධා කරන ප්‍රෝටීන, පොලිසැකරයිඩ, ලුණු අයන ආදිය ඉවත් නොකරන්න.සංකීර්ණ තත්ත්‍වයන් යටතේ එන්සයිම ක්‍රියාකාරිත්වය සහ ප්‍රතිනිර්මාණ නිරවද්‍යතාවය සහතික කිරීම සඳහා ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියේ ඇති න්‍යෂ්ටික අම්ල පොලිමරේස් සහ PCR මිශ්‍රණයට විශිෂ්ට ප්‍රතිරෝධයක් සහ අනුවර්තනයක් අවශ්‍ය වේ.

පස්වනුව, කිසිදු න්‍යෂ්ටික අම්ල සුපෝෂණ ප්‍රතිකාරයකින් තොරව සෘජු PCR තාක්‍ෂණයෙන් ඉලක්ක කරගත් පටක නියැදිය සහ අච්චු ප්‍රමාණය ඉතා කුඩා වන අතර, ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියට අතිශය ඉහළ සංවේදීතාවයක් සහ විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාවයක් අවශ්‍ය වේ.