නායකත්වය

දිගු කේතීකරණය නොවන RNA, lncRNA යනු නියුක්ලියෝටයිඩ 200 ට වඩා වැඩි දිගක් සහිත, සාමාන්‍යයෙන් 200-100000 nt අතර කේතීකරණය නොවන RNA වේ.lncRNA විසින් ජාන ප්‍රකාශනය අපිජෙනටික්, පිටපත් කිරීම සහ පශ්චාත් පිටපත් කිරීමේ මට්ටම් වලින් නියාමනය කරන අතර X වර්ණදේහ නිශ්ශබ්ද කිරීම, ජාන මුද්‍රණය සහ ක්‍රොමැටින් වෙනස් කිරීම, පිටපත් කිරීම සක්‍රීය කිරීම, පිටපත් කිරීමේ මැදිහත්වීම, න්‍යෂ්ටික ප්‍රවාහනය, සෛල චක්‍ර නියාමනය, සෛල විභේදනය සම්බන්ධ ක්‍රියාවලියට සම්බන්ධ වන්දි ක්‍රියාවලියට සමීප බලපෑම් සහ අනෙකුත් වන්දි ක්‍රියාවලීන්ට සමීප බලපෑම් වේ. ence, සංවර්ධනය සහ මානව රෝග වැළැක්වීම, සහ දැනට ජෛව වෛද්‍ය ක්ෂේත්‍රයේ උණුසුම් ස්ථානවලින් එකකි.

01  LncRNA වර්ග සහ ලක්ෂණ

ඉහත රූපයේ දැක්වෙන පරිදි lncRNA එය සෑදීමේ විවිධ ප්‍රභවයන් අනුව බොහෝ වර්ග වලට බෙදා ඇත.පහත ලක්ෂණ ඇත:

1. lncRNA සාමාන්‍යයෙන් දිගු වන අතර, ගතික ප්‍රකාශනය සහ අවකලනය අතරතුර විවිධ බෙදීම් ක්‍රම ඇත
2. කේතීකරණ ජාන සමඟ සසඳන විට, lncRNA සාමාන්යයෙන් අඩු ප්රකාශන මට්ටමක් ඇත
3. බොහෝ lncRNAs පටක අවකලනය සහ සංවර්ධනය කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී පැහැදිලි තාවකාලික සහ අවකාශීය ප්‍රකාශන විශේෂත්වයක් ඇත.
4. පිළිකා සහ අනෙකුත් රෝග වල ලාක්ෂණික ප්රකාශනයන් ඇත
5. lncRNA හි උප සෛලීය ස්ථාන විවිධ වේ
6. සංරක්‍ෂණයේ අනුක්‍රමය අඩුය, නමුත් ශ්‍රිතයට යම් තරමක සංරක්ෂණයක් ඇත, යනාදිය.

02 LncRNA ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම පිළිබඳ නිතර අසන ප්‍රශ්න

සෛලවල LncRNA හි අඩු අන්තර්ගතය, දිගු දිග සහ ඉහළ මට්ටමේ ව්‍යුහය හේතුවෙන්, එවැනි RNA බොහෝ විට කඳ ලූප හෝ හිසකෙස් වැනි සංකීර්ණ ව්‍යුහයන් ඇති අතර, RT-qPCR අසාර්ථක ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ හෝ අඩු කාර්යක්ෂමතාවයේ ගැටළු වලට ගොදුරු වේ.

03 LncRNA ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ විසඳුම

මධ්‍යම රීතියේ දී, RNA වෛරස් අච්චුවක් ලෙස RNA භාවිතා කරමින් DNA සංස්ලේෂණය කිරීම සඳහා තමන්ගේම ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම භාවිතා කරන ක්‍රියාවලිය ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම ලෙස හැඳින්වේ.RNA වෛරස් ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් භාවිතයෙන් cDNA සැකිල්ල in vitro සංස්ලේෂණය කිරීමේ ක්‍රියාවලිය ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම ලෙස හැඳින්වේ.ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පද්ධතියට ඇතුළත් ප්‍රධාන මූලද්‍රව්‍ය: RNA සැකිල්ල, ප්‍රතිලෝම පිටපත, ප්‍රයිමර් සහ අනෙකුත් සංරචක.

1.RNA සැකිල්ල

ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම මත RNA සැකිල්ලේ බලපෑම එහි ව්‍යුහය, සංශුද්ධතාවය සහ අඛණ්ඩතාවයෙන් පිළිබිඹු වේ.නිස්සාරණය කරන ලද RNA හි සංශුද්ධතාවය සහ අඛණ්ඩතාව වැඩි වන තරමට, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි වන අතර පසුව ලැබෙන ප්‍රමාණාත්මක ප්‍රතිඵල වඩාත් නිවැරදි වේ.බහුලව භාවිතා වන RNA නිස්සාරණ ප්‍රතික්‍රියාකාරක මගින් පවිත්‍ර කරන ලද RNA බොහෝ විට ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් වලට ප්‍රබල නිෂේධනීය බලපෑමක් ඇති ඇල්කොහොල් සහ ග්වානඩින් ලවණවල අවශේෂ අඩංගු වේ.

2.ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම

ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම සමස්ත ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පද්ධතියට ප්‍රධාන බලපෑමක් ඇති කරයි.බොහෝ රසායනාගාරවල භාවිතා කරන ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් සඳහා සුදුසු උෂ්ණත්වය සාමාන්‍යයෙන් 42 ° C වේ.ඇත්ත වශයෙන්ම, ඉහළ මට්ටමේ RNA ව්‍යුහය විවෘත කිරීම සඳහා ඉහළ උෂ්ණත්වයක් අවශ්‍ය වන අතර ප්‍රතිලෝම පිටපත සඳහා අවශ්‍යතා වැඩි වේ.

3.ප්‍රයිමර්

ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ ප්‍රයිමර්වලට ජාන-විශේෂිත ප්‍රයිමර්, සසම්භාවී ප්‍රයිමර් සහ ඔලිගෝ ඩීටී ප්‍රයිමර් ඇතුළත් වේ.බොහෝ lncRNA වල polyA වලිග අඩංගු නොවන අතර, Oligo dT සමඟ සසම්භාවී ප්‍රයිමර් නිවැරදිව ගැලපීම වැදගත් වේ.

4. අනෙකුත් සංරචක

ආර්එන්ඒ ක්ෂය වීමට විශේෂයෙන් පහසු බැවින්, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පද්ධතියේ සංරචක හඳුන්වාදීම අවම කළ හැකි අතර, එමඟින් RNase ඇතුළු වීම ඵලදායි ලෙස වළක්වා ගත හැකි අතර ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ සුමට ප්‍රගතිය සහතික කළ හැකිය.

Fඔරිජින්RNA සැකිල්ලෙන් ලබා ගනී, qPCR වෙත ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම

ඔබේ lncRNA හඳුනාගැනීම සඳහා සවිස්තරාත්මකව රැගෙන යන්න

සත්ව මුළු RNA Isolationකට්ටලය (gDNA ඉවත් කිරීමේ තීරුව සමඟ)

සෛල මුළු RNA Isolationකට්ටලය (gDNA ඉවත් කිරීමේ තීරුව සමඟ)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase සමඟ)(lncRNA වෙතින් පළමු-පෙළ cDNA සංශ්ලේෂණය සඳහා සුපිරි Premix)

රියල් ටයිම් PCR EasyTM-SYBR Green I

Aවාසි ofRNA නිස්සාරණය:

කට්ටලය තුන්වන පරම්පරාවේ RNA නිස්සාරණ තාක්ෂණය භාවිතා කරයි, DNase භාවිතා කිරීමට අවශ්‍ය නොවේ.

96, 24, 12, සහ 6-ළිං තහඩු සංස්කෘතික සෛල වලින් විනාඩි 11, gDNA-රහිත, ඉහළ සංශුද්ධතාවය, උසස් තත්ත්වයේ සම්පූර්ණ සෛල RNA ඉහළ කාර්යක්ෂම නිස්සාරණය.

lncRNA ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ වාසි:

ප්‍රවේණික DNA දූෂණය ඉක්මනින් ඉවත් කිරීම සඳහා LncRNA සඳහා විෙශේෂෙයන් සංවර්ධනය කරන ලද ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පද්ධතියකි.

ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ පද්ධතියට ඉහළ තාප ස්ථායීතාවයක් ඇති අතර තවමත් 50°C හි හොඳ ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ කාර්ය සාධනයක් ඇත.

ඉහළ GC අන්තර්ගතයක් සහ සංකීර්ණ ද්විතියික ව්‍යුහයක් සහිත සැකිලි ඉහළ කාර්යක්ෂමතාවයකින් ආපසු හැරවිය හැක.

වාසිof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase හි ඉහළ විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාව, ඉහළ විස්තාරණ සංවේදීතාව සහ ඉහළ විස්තාරණ විශේෂත්වය ඇත.

ප්‍රශස්ත කරන ලද Real PCR Easy Mix SYBR Green I ඉහළ හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාවයක් ඇති කරයි, සහ එහි ප්‍රතිදීප්ත තීව්‍රතාවය සමාන නිෂ්පාදනවලට වඩා 3-5 ගුණයක් වන අතර එමඟින් විවිධ වර්ගයේ ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක පරීක්ෂණවල අවශ්‍යතා සපුරාලිය හැකිය.