පසුගිය වසර දහය තුළ, CRISPR මත පදනම් වූ ජාන සංස්කරණ තාක්ෂණය වේගයෙන් වර්ධනය වී ඇති අතර, මානව සායනික පරීක්ෂණ වලදී ජානමය රෝග සහ පිළිකා සඳහා ප්‍රතිකාර කිරීම සඳහා සාර්ථකව යොදා ගෙන ඇත.ඒ අතරම, ලොව පුරා සිටින විද්‍යාඥයින් දැනට පවතින ජාන සංස්කරණ මෙවලම් සහ තීරණාත්මක ගැටළු විසඳීම සඳහා ජාන සංස්කරණ විභවයන් සහිත නව නව මෙවලම් නිරන්තරයෙන් භාවිතා කරයි.

2021 සැප්තැම්බරයේදී, Zhang Feng ගේ කණ්ඩායම විද්‍යා සඟරාවේ [1] පත්‍රිකාවක් ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද අතර, පුළුල් පරාසයක ට්‍රාන්ස්පෝස්ටර් RNA මාර්ගෝපදේශ න්‍යෂ්ටික අම්ල එන්සයිම කේතනය කර එයට ඔමේගා පද්ධතිය (ISCB, ISRB, TNP8 ඇතුළුව) ලෙස නම් කරන ලදී.ωRNA යන කැපුම් DNA ද්විත්ව දාමයට මඟ පෙන්වීම සඳහා Omega පද්ධතිය RNA හි කොටසක් භාවිතා කරන බව අධ්‍යයනයෙන් සොයාගෙන ඇත.වඩාත් වැදගත් වන්නේ, මෙම න්යෂ්ටික අම්ල එන්සයිම ඉතා කුඩා වන අතර, CAS9 න් 30% ක් පමණ වන අතර, එයින් අදහස් වන්නේ ඒවා සෛල වෙත ලබා දීමට වැඩි ඉඩක් ඇති බවයි.

2022 ඔක්තෝබර් 12 වන දින, Zhang Feng ගේ කණ්ඩායම Nature සඟරාවේ ප්‍රකාශයට පත් කරන ලදී: Omega Nickase ISRB හි ව්‍යුහය ωrna සහ Target DNA සමඟ [2].

ISRB-ωRNA හි ශීත කළ ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂ ව්‍යුහය සහ ඔමේගා පද්ධතියේ ඉලක්කගත DNA සංකීර්ණය අධ්‍යයනය තවදුරටත් විශ්ලේෂණය කළේය.

ISCB යනු CAS9 හි මුතුන් මිත්තන් වන අතර ISRB යනු ISCB හි HNH න්‍යෂ්ටික අම්ල වසම නොමැතිකමේ එකම වස්තුවයි, එබැවින් ප්‍රමාණය කුඩා වන අතර ඇමයිනෝ අම්ල 350 ක් පමණ වේ.DNA තවදුරටත් සංවර්ධනය සහ ඉංජිනේරුමය පරිවර්තනය සඳහා පදනම සපයයි.

RNA-මාර්ගෝපදේශිත IsrB යනු ට්‍රාන්ස්පෝසන් වල IS200/IS605 සුපිරි පවුල විසින් කේතනය කරන ලද OMEGA පවුලේ සාමාජිකයෙකි.ෆයිලොජෙනටික් විශ්ලේෂණය සහ හවුල් අද්විතීය වසම් වලින්, IsrB, Cas9 හි මුතුන්මිත්තෙකු වන IscB හි පූර්වගාමියා විය හැකිය.

2022 මැයි මාසයේදී Cornell විශ්ව විද්‍යාලයේ Lovely Dragon Laboratory විසින් Science [3] සඟරාවේ IscB-ωRNA හි ව්‍යුහය සහ එහි DNA කැපීමේ යාන්ත්‍රණය විශ්ලේෂණය කරමින් ලිපියක් ප්‍රකාශයට පත් කරන ලදී.

IscB සහ Cas9 සමඟ සසඳන විට, IsrB හි HNH න්‍යෂ්ටික වසම, REC lobe සහ PAM අනුක්‍රමික අන්තර්ක්‍රියා කරන වසම් බොහොමයක් නොමැත, එබැවින් IsrB Cas9 ට වඩා බෙහෙවින් කුඩා වේ (ඇමයිනෝ අම්ල 350 ක් පමණ).කෙසේ වෙතත්, IsrB හි කුඩා ප්‍රමාණය සාපේක්ෂ වශයෙන් විශාල මාර්ගෝපදේශක RNA මගින් සමතුලිත වේ (එහි ඔමේගා RNA nt 300 පමණ දිගයි).

Zhang Feng ගේ කණ්ඩායම IrB (DtIsrB) හි ක්‍රියෝ-ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂ ව්‍යුහය තෙත්-තාප නිර්වායු බැක්ටීරියාව Desulfovirgula thermocuniculi සහ එහි සංකීර්ණ ωRNA සහ ඉලක්කගත DNA වලින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.ව්‍යුහාත්මක විශ්ලේෂණය පෙන්නුම් කළේ IsrB ප්‍රෝටීනයේ සමස්ත ව්‍යුහය Cas9 ප්‍රෝටීන් සමඟ කොඳු නාරටිය ව්‍යුහයක් බෙදා ගත් බවයි.

නමුත් වෙනස වන්නේ Cas9 ඉලක්ක හඳුනාගැනීම පහසු කිරීම සඳහා REC lobe භාවිතා කරන අතර, IsrB එහි ωRNA මත රඳා පවතින අතර, ඉන් කොටසක් REC මෙන් ක්‍රියා කරන සංකීර්ණ ත්‍රිමාන ව්‍යුහයක් සාදයි.

RuvC වෙතින් පරිණාමය අතරතුර IsrB සහ Cas9 හි ව්‍යුහාත්මක වෙනස්කම් හොඳින් අවබෝධ කර ගැනීම සඳහා, Zhang Feng ගේ කණ්ඩායම Thermus thermophilus වෙතින් RuvC (TtRuvC), IsrB, CjCas9 සහ SpCas9 හි ඉලක්කගත DNA-බන්ධන ව්‍යුහයන් සංසන්දනය කළේය.

IsrB සහ එහි ωRNA හි ව්‍යුහාත්මක විශ්ලේෂණය මගින් IsrB-ωRNA එක්ව ඉලක්කගත DNA හඳුනාගෙන ඒවා ඉවත් කරන්නේ කෙසේද යන්න පැහැදිලි කරයි, තවද මෙම කුඩා න්‍යෂ්ටිය තවදුරටත් සංවර්ධනය කිරීම සහ ඉංජිනේරුකරණය සඳහා පදනමක් සපයයි.අනෙකුත් RNA-මාර්ගෝපදේශ පද්ධති සමඟ සැසඳීම ප්‍රෝටීන සහ RNA අතර ක්‍රියාකාරී අන්තර්ක්‍රියා ඉස්මතු කරයි, මෙම විවිධ පද්ධතිවල ජීව විද්‍යාව සහ පරිණාමය පිළිබඳ අපගේ අවබෝධය වැඩි දියුණු කරයි.

සබැඳි:

1.https://www.science.org/doi/10.1126/science.abj6856

2.https://www.science.org/doi/10.1126/science.abq7220

3.https://www.nature.com/articles/s41586-022-05324-6