COVID-19 යනු දරුණු උග්‍ර ශ්වසන සින්ඩ්‍රෝමය කොරෝනා වයිරස් වර්ගය 2 නිසා ඇති වන බෝවන රෝගයකි. පුද්ගලයෙකු ආසාදනය වූ විට, වඩාත් පොදු රෝග ලක්ෂණ වන්නේ උණ, කැස්ස සහ හුස්ම හිරවීමයි.
පරීක්ෂා කිරීම සඳහා භාවිතා කරන සාම්පල නාසෝෆරින්ජියල් swabs හෝ oropharyngeal swabs මගින් එකතු කළ හැක.
PCR යනු කුමක්ද?
කොරෝනා වයිරස් හඳුනාගැනීමේ සම්මත ක්‍රමය වන්නේ පොලිමරේස් දාම ප්‍රතික්‍රියාව, PCR ය.මෙය අණුක ජීව විද්‍යාවේ බහුලව භාවිතා වන ක්රමයකි.එය විශේෂිත DNA කොටස් මිලියන ගණනක් සිට බිලියන ගණනක් දක්වා ඉක්මනින් පිටපත් කළ හැකිය.
නව කොරෝනා වයිරසයේ ඉතා දිගු තනි නූල් සහිත RNA ජෙනෝමයක් අඩංගු වේ.PCR මගින් මෙම වෛරස් හඳුනා ගැනීම සඳහා, RNA අණු ප්රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් මගින් ඒවායේ අනුපූරක DNA අනුක්‍රමය බවට පරිවර්තනය කළ යුතු අතර, පසුව අලුතින් සංස්ලේෂණය කරන ලද DNA සාමාන්‍ය PCR ක්රියා පටිපාටි මගින් වර්ධනය කළ හැකි අතර එය සාමාන්යයෙන් RT-PCR ලෙස හැඳින්වේ.
RT-PCR ක්රියාවලිය
RNA නිස්සාරණය
මෙම ක්‍රමය සිදු කිරීම සඳහා වෛරස් RNA මූලික වශයෙන් නිස්සාරණය කළ යුතුය.පහසු, වේගවත් සහ ඵලදායී වෙන් කිරීම සඳහා විවිධ RNA පිරිසිදු කිරීමේ කට්ටල භාවිතා කළ හැක.
වාණිජ කට්ටලයක් භාවිතයෙන් වෛරස් RNA නිස්සාරණය කිරීම සඳහා, පළමුව නියැදිය ක්ෂුද්‍ර කේන්ද්‍රපසාරී නලයකට එකතු කර පසුව එය ලයිසිස් බෆරය සමඟ මිශ්ර කරන්න.මෙම බෆරය බෙහෙවින් අඩු වී ඇති අතර සාමාන්යයෙන් ෆීනෝල් සහ ග්වානයිඩින් අයිසොතියෝසයනේට් වලින් සමන්විත වේ.මීට අමතරව, නොවෙනස්ව වෛරස් RNA හුදකලා කිරීම සහතික කිරීම සඳහා RNase නිෂේධක සාමාන්යයෙන් ලයිසිස් බෆරයේ පවතී.
ලයිසිස් බෆරය එකතු කිරීමෙන් පසු, ස්පන්දනය මගින් මිශ්ර කරන නළය සුළි කර කාමර උෂ්ණත්වයේ දී පුර්ව කථනය කරන්න.පසුව ලයිසිස් බෆරය මගින් සපයනු ලබන අතිශයින් පිරිහෙන තත්ත්ව යටතේ වෛරසය ලයිස් කරනු ලැබේ.
නියැදිය ලයිස් කිරීමෙන් පසුව, පිරිසිදු කිරීමේ ක්රියා පටිපාටිය සඳහා කේන්ද්රාපසාරී නලයක් භාවිතා කරනු ලැබේ.නියැදිය කේන්ද්රාපසාරී නලයට පටවා පසුව කේන්ද්රාපසාරී වේ.
මෙම ක්රියාපටිපාටිය ඝන අදියර නිස්සාරණය කිරීමේ ක්රමයකි, ස්ථාවර අදියර සිලිකා ජෙල් අනුකෘතියකින් සමන්විත වේ.
ප්‍රශස්ත ලුණු සහ pH තත්ත්ව යටතේ, RNA අණු සිලිකා පටලයට බන්ධනය වේ.
ඒ සමගම, ප්රෝටීන් සහ අනෙකුත් දූෂිත ද්රව්ය ඉවත් කරනු ලැබේ.
කේන්ද්රාපසාරී කිරීමෙන් පසු, කේන්ද්රාපසාරී නළය පිරිසිදු එකතු කිරීමේ නලයකට දමා, පෙරීම ඉවතලන්න, ඉන්පසු සේදුම් බෆරය එක් කරන්න.
වොෂ් බෆරය පටලය හරහා බල කිරීම සඳහා නැවත කේන්ද්රාපසාරී තුළ නළය තබන්න.මෙය පටලයෙන් ඉතිරිව ඇති සියලුම අපද්‍රව්‍ය ඉවත් කරනු ඇත, RNA පමණක් සිලිකා ජෙල් සමඟ බැඳී ඇත.
නියැදිය සෝදාගත් පසු, නළය පිරිසිදු ක්ෂුද්‍ර කේන්ද්‍රපසාරී නලයකට දමා එලියුෂන් බෆරය එක් කරන්න.
පසුව එය පටලය හරහා එලියුෂන් බෆරය බල කිරීමට කේන්ද්රාපසාරී වේ.එලියුෂන් බෆරය මගින් වෛරස් ආර්එන්ඒ ස්පින් තීරුවෙන් ඉවත් කරන අතර ප්‍රෝටීන, නිෂේධක සහ අනෙකුත් අපවිත්‍ර ද්‍රව්‍යවලින් තොර පිරිසිදු කළ ආර්එන්ඒ ලබා ගනී.
පියවර 2
මිශ්ර සාන්ද්රණය
වෛරස් RNA නිස්සාරණය කිරීමෙන් පසුව, මීලඟ පියවර වන්නේ PCR වර්ධක සඳහා ප්රතික්රියා මිශ්රණය සකස් කිරීමයි.මෙම පියවරේදී සාන්ද්රණය භාවිතා වේ.මෙම සාන්ද්‍ර ද්‍රාවණය පූර්ව මිශ්ර සාන්ද්‍ර ද්‍රාවණයක් වන අතර එය ප්‍රිමික්ස්, ප්රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස්, නියුක්ලියෝටයිඩ, ෆෝවර්ඩ් ප්‍රයිමර්, රිවර්ස් ප්‍රයිමර්, ටක්මන් ප්‍රෝබ් සහ ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් වලින් සමන්විත වේ.
අවසාන වශයෙන්, මෙම ප්රතික්රියා මිශ්රණය සම්පූර්ණ කිරීම සඳහා, RNA අච්චුව එකතු කරනු ලැබේ.නාල ස්පන්දන සුලිය මගින් මිශ්ර කර, පසුව ප්රතික්රියා මිශ්රණය PCR තහඩුවට පටවනු ලැබේ.PCR තහඩුව සාමාන්යයෙන් ළිං 96 ක් අඩංගු වන අතර එකවර සාම්පල කිහිපයක් විශ්ලේෂණය කළ හැකිය.
පියවර 3
PCR විස්තාරණය
මීලඟට, අවශ්යයෙන්ම තාප චක්රලේඛය වන PCR යන්ත්රයේ තහඩුව තබන්න.
RdrRP ජානය, E ජානය සහ N ජානය තුළ ඉලක්ක අනුපිළිවෙල විස්තාරණය කිරීමෙන් 2019 නව කොරෝනා වයිරසය හඳුනා ගැනීමට තත්‍ය කාලීන RT-PCR භාවිතා කරයි.ඉලක්කගත ජාන තෝරා ගැනීම ප්‍රාථමික සහ පරීක්ෂණ අනුපිළිවෙල මත රඳා පවතී.
RT-PCR හි පළමු පියවර වන්නේ ප්රතිලෝම පිටපත් කිරීමයි.වයිරස් RNA ජෙනෝමයේ අනුපූරක කොටසට බැඳෙන PCR ප්රතිලෝම ප්‍රාථමිකය මගින් ආරම්භ කරන ලද අනුපූරක DNA වල පළමු තන්තුව සංස්ලේෂණය කෙරේ.ඉන්පසුව ප්රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් වයිරස් RNA වලට අනුපූරක DNA සංස්ලේෂණය කිරීම සඳහා ප්‍රාථමිකයේ 3′අන්තයට DNA නියුක්ලියෝටයිඩ එක් කරයි.මෙම පියවරේ උෂ්ණත්වය සහ කාලසීමාව රඳා පවතින්නේ භාවිතා කරන ප්‍රයිමර්, ඉලක්ක RNA සහ ප්රතිලෝම පිටපත් කිරීම මත ය.
මීළඟට, ආරම්භක denaturation පියවරක් යොදනු ලබන අතර, එහි ප්‍රතිඵලය වන්නේ RNA-DNA දෙමුහුන් වල denaturation වේ.DNA පොලිමරේස් සක්රිය කිරීම සඳහා මෙම පියවර අවශ්ය වේ.ඒ සමගම, ප්රතිලෝම පිටපත් කිරීම අක්රිය වේ.
PCR තාප චක්‍ර මාලාවකින් සමන්විත වේ.සෑම චක්රයක්ම denaturation, annealing සහ extension පියවර වලින් සමන්විත වේ.
denaturation පියවරට ප්රතික්රියා කුටිය සෙල්සියස් අංශක 95 දක්වා රත් කිරීම සහ ද්විත්ව කෙඳි සහිත DNA අච්චුව විකෘති කිරීම සඳහා එය භාවිතා කිරීම ඇතුළත් වේ.
මීලඟ පියවරේදී, ප්රතික්රියා උෂ්ණත්වය සෙල්සියස් අංශක 58 දක්වා අඩු කරනු ලබන අතර, ඉදිරි ප්‍රාථමිකයට එහි තනි කෙඳි සහිත DNA අච්චුවේ අනුපූරක කොටස වෙත විවර කිරීමට ඉඩ සලසයි.නිර්වින්දන උෂ්ණත්වය කෙලින්ම රඳා පවතින්නේ ප්‍රාථමිකයේ දිග සහ සංයුතිය මත ය.
විස්තීරණ පියවරේදී, DNA පොලිමරේස් DNA සැකිල්ලට අනුපූරක වන නව DNA පොටක් සංස්ලේෂණය කරයි.ප්රතික්රියා මිශ්‍රණයෙන් 5′ සිට 3′දිශාව දක්වා ඇති සැකිල්ලට අනුපූරක නිදහස් න්‍යෂ්ටීන් එක් කිරීමෙනි.මෙම පියවරේ උෂ්ණත්වය භාවිතා කරන DNA පොලිමරේස් මත රඳා පවතී.
පළමු චක්‍රයෙන් පසු ද්විත්ව නූල් සහිත DNA ඉලක්කයක් ලබා ගනී.
ඉන්පසුව, දෙවන චක්රය ඇතුල් කරන්න.තනි කෙඳි DNA අණු දෙකක් නිපදවීම සඳහා ද්විත්ව නූල් DNA අනාවරණ කර ඇත.
මීලඟ පියවරේදී, ප්රතික්රියා උෂ්ණත්වය පහත හෙලනු ලැබේ, ප්‍රයිමර් එක් එක් තනි කෙඳි DNA අච්චුවකට ඇනීල් කරනු ලැබේ, සහ Taq-man පරීක්ෂණය ඉලක්කගත DNA හි අනුපූරක කොටස වෙත විවර කරනු ලැබේ.
TaqMan ගවේෂණය සමන්විත වන්නේ ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ ගවේෂණයේ 5′අන්තයට සහසංයුජව සම්බන්ධ වූ ෆ්ලෝරෝෆෝරයකින් ය.සයිකලයේ ආලෝක ප්‍රභවයෙන් උද්දාමයට පත් වූ විට, ෆ්ලෝරෝෆෝරය ප්‍රතිදීප්ත විමෝචනය කරයි.ඊට අමතරව, ගවේෂණය 3′අන්තයේ ඇති නිවාදැමීමකින් සමන්විත වේ.වාර්තාකරු ජානය නිවාදැමීමට සමීප වීම ප්‍රතිදීප්තතාව හඳුනා ගැනීම වළක්වයි.
දිගු කිරීමේ පියවරේදී, DNA පොලිමරේස් නව නූල් සංස්ලේෂණය කරයි.පොලිමරේස් TaqMan පරීක්‍ෂණයට ළඟා වූ විට, එහි ආවේණික 5′න්‍යෂ්ටික ක්‍රියාකාරකම් මඟින් පරීක්ෂණය සිඳී, නිවාදැමීමෙන් ඩයි වෙන් කරයි.
PCR හි සෑම චක්‍රයක් සමඟම, වැඩි සායම් අණු මුදා හරිනු ලැබේ, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස සංස්ලේෂණය කරන ලද ඇම්ප්ලිකන් ගණනට සමානුපාතිකව ප්‍රතිදීප්ත තීව්‍රතාවය වැඩි වේ.
මෙම ක්‍රමය මඟින් නියැදියේ ඇති අනුපිළිවෙලක සංඛ්‍යාව තක්සේරු කිරීමට ඉඩ සලසයි.එක් එක් චක්රය තුළ ද්විත්ව නූල් සහිත DNA කොටස් ගණන දෙගුණ වේ.එබැවින් PCR ඉතා කුඩා සාම්පල විශ්ලේෂණය කිරීමට භාවිතා කළ හැකිය.
ප්‍රතිදීප්ත සංඥාව මැනීම සඳහා, ටංස්ටන් හැලජන් ලාම්පුව, උද්දීපන පෙරහන, පරාවර්තකය, කාච, විමෝචන පෙරහන සහ ආරෝපණ සම්බන්ධක උපාංග-භාවිත CCD කැමරාව.
පියවර 4 හඳුනා ගැනීම
ප්‍රතිදීප්ත සංඥාව මැනීම සඳහා, ටංස්ටන් හැලජන් ලාම්පුව, උද්දීපන පෙරහන, පරාවර්තකය, කාච, විමෝචන පෙරහන සහ ආරෝපණ සම්බන්ධක උපාංග-භාවිත CCD කැමරාව.
ලාම්පුවෙන් පෙරාගත් ආලෝකය පරාවර්තකයෙන් පරාවර්තනය වන අතර, කන්ඩෙන්සර් කාචය හරහා ගමන් කර, එක් එක් කුහරයේ කේන්ද්රය වෙත අවධානය යොමු කරයි.එවිට සිදුරෙන් නිකුත් වන fluorescence දර්පණයෙන් පරාවර්තනය වී විමෝචන පෙරහන හරහා ගොස් CCD කැමරාව මගින් අනාවරණය වේ.සෑම PCR චක්‍රයකම, ස්වයං-උද්දීපනය වූ ෆ්ලෝරෝෆෝර් ආලෝකය CCD මගින් හඳුනාගත හැකිය.
එය ග්‍රහණය කරගත් ආලෝකය ඩිජිටල් දත්ත බවට පරිවර්තනය කරයි.මෙම ක්‍රමය තත්‍ය කාලීන PCR ලෙස හඳුන්වන අතර එය PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ ප්‍රගතිය තත්‍ය කාලීනව නිරීක්ෂණය කිරීමට ඉඩ සලසයි.
පසු කාලය: ජූලි-19-2021
