RNase යනු බොහෝ විට RNA නිස්සාරණය අත්හදා බැලීම් කරන බොහෝ සිසුන්ට ඇසීමට අවශ්‍ය නොවන සංවේදී වචනයකි.සම්පුර්ණයෙන්ම සන්නද්ධව, අවසානයේ උග්‍ර විෂ සහිත ප්‍රතික්‍රියාකාරක වන ෆීනෝල් ​​සහ ක්ලෝරෝෆෝම් සමඟ නිස්සාරණය කරන ලද RNA ක්ෂය විය.මම සමාදාන නොවෙමි!!!අද, අපි සුප්‍රසිද්ධ Rnase හි ආරම්භය දෙස බලමු.

Ribonuclease (RNase) නොහොත් RNase යනු RNA කුඩා අණු බවට ජල විච්ඡේදනය කළ හැකි න්‍යෂ්ටියකි.RNase, කුඩා අණු ප්රෝටීනයක් ලෙස, අසාමාන්ය ලෙස ස්ථායී වේ .සාම්ප්‍රදායික ඉහළ උෂ්ණත්වය සහ අධි පීඩන වාෂ්ප වන්ධ්‍යාකරණය සහ ප්‍රෝටීන් නිෂේධක මගින් එය සම්පූර්ණයෙන්ම අක්‍රිය කළ නොහැක.RNase හි ස්ථායීතාවය ප්‍රධාන වශයෙන් ව්‍යුහයේ ඇති ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන වලින් පැමිණේ.උදාහරණයක් ලෙස, ගව අග්න්‍යාශයේ බහුලව භාවිතා වන RNase හි ඇත්තේ ඇමයිනෝ අම්ල 124 ක් පමණි, නමුත් ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන 4 ක් අඩංගු වේ.සල්ෆර් බන්ධන සහ ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන RNase විශිෂ්ට තාප ස්ථායීතාවයක් ලබා දෙයි.මීට අමතරව, rnase සාපේක්ෂව කුඩා අණුක බරක් ඇති අතර බොහෝ අවස්ථාවලදී එහි මුල් අනුකූලතාව ඉක්මනින් ප්රතිස්ථාපනය කළ හැකිය.

අතිශයින්ම ස්ථාවර වීමට අමතරව,RNases රසායනාගාරයේ සෑම තැනකම පවතී .RNase යනු ජීව විද්‍යාත්මක ආරක්ෂක යාන්ත්‍රණයකි.සෛලයක් සඳහා, බාහිර RNA බොහෝ විට මාරාන්තික වේ.බාහිර DNA හා සසඳන විට, බාහිර RNA බොහෝ විට භයානක වේ.RNA සතුටින් පිටපත් කර පරිවර්තනය කර ඇත, එබැවින් සියලුම ජීවීන් පාහේ බාහිර RNA ආක්‍රමණයෙන් ආරක්ෂා වීමට RNases පරිණාමය කර ඇත.එමනිසා, රසායනාගාරයේ වගා කරන බැක්ටීරියා සෛල සහ RNA නිස්සාරණය කරන ඔබ RNase හි සුවඳ පිට කරයි.මිනිස් සිරුරේ තරලවල (කෙල, කඳුළු, ආදිය) RNase විශාල ප්‍රමාණයක් අඩංගු වේ, එබැවින් RNA ක්ෂය වූ විට අඬන්න එපා.ඔබ වැඩි වැඩියෙන් අඬන තරමට, RNA ක්ෂය වීම නරක අතට හැරේ!!RNA නිස්සාරණය සඳහා Daiyu සහෝදරිය සුදුසු නොවේ!

මීට අමතරව, ඔබේ සියුම් සමෙහිද RNase විශාල ප්‍රමාණයක් අඩංගු වන අතර, සමේ ස්පර්ශ කර ඇති සලකුණු, පයිප්ප, ශීතකරණ දොරවල් සහ දොර හැසිරවීම් වලද RNase අඩංගු වේ.

බොහෝ රස්තියාදු වීමත් සමඟ, අපි RNases සමඟ කටයුතු කරන්නේ කෙසේදැයි බලමු.

ආර්එන්ඒ ඉවත් කිරීමේදී සෑම කෙනෙකුම සිතන පළමු දෙයDEPC(ඩයිතයිල් පයිරොකාබනේට්).DEPC ප්‍රධාන වශයෙන් RNase සක්‍රීය කාණ්ඩයේ histidine හි imidazole මුදුව සමඟ ඒකාබද්ධ වීමෙන් ප්‍රෝටීන් ප්‍රතික්ෂේප කරයි, එමඟින් එන්සයිමයේ ක්‍රියාකාරිත්වය වළක්වයි.0.1% DEPC Rnase මත වඩා හොඳ ඉවත් කිරීමේ බලපෑමක් ඇති කළ හැකි නමුත්, DEPC යනු පිළිකා කාරකයක් බව අප අවධානය යොමු කළ යුතුය, එබැවින් එය භාවිතා කිරීමේදී විශේෂ අවධානයක් යොමු කළ යුතුය.

RNase සඳහා, අපි පැති දෙකකින් ආරම්භ කළ යුතුය,පළමුවැන්න නම් අන්තරාසර්ග RNase හි ක්‍රියාකාරිත්වය වළක්වයි

ට්‍රයිසෝල් හි අඩංගු ග්වානයිඩින් අයිසොතියෝසයනේට් සහ ඩීටීටී වැනි සාම්ප්‍රදායික ආර්එන්ඒ නිස්සාරණ ප්‍රතික්‍රියාකාරක මගින් ආර්එන්ඒස් හි ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධනය විවෘත කළ හැකි නමුත් තවමත් සමහර ආර්එන්ඒස් ඇත, විශේෂයෙන් පටක සාම්පලවල, එබැවින් අඩු උෂ්ණත්වය කෙරෙහි අවධානය යොමු කරන්න.

1.පටක සාම්පලය පිටතට ගත් වහාම ද්‍රව නයිට්‍රජන් තුළ හෝ වාණිජ RNA සංරක්ෂණ ද්‍රාවණයක ගිල්වන්න.

2.සෛල සාම්පලයේ ආර්එන්ඒ නිස්සාරණය කිරීමෙන් පසු එය ලයිසිස් ද්‍රාවණයට එකතු කර අයිස් පෙට්ටිය මත ලයිස් කරන්න.

3. ඇඹරීම සඳහා දියර නයිට්රජන් භාවිතා කිරීම වඩාත් සුදුසුය පටක සාම්පල සමජාතීය වූ විට.ද්රව නයිට්රජන් නොමැතිව විද්යුත් සමජාතීයකාරකයක් භාවිතා කරන විට, සමජාතීය ඇඩප්ටරය සම්පූර්ණයෙන්ම පූර්ව සිසිලනය කිරීමට අවධානය යොමු කරන්න.

දෙවැන්න බාහිර DNase ය

1.සම්පුර්ණයෙන්ම සන්නද්ධ වන්න, රසායනාගාර කබායක් පළඳින්න, වෙස්මුහුණක් පැළඳීමට සහ නව අත්වැසුම් යුගලයක් පැළඳීමට වග බලා ගන්න (එතරම් අරපිරිමැස්මෙන් නොසිටින්න!! ට්‍රයිසෝල් ඉතා විඛාදනයට ලක්වන බවත්, එය අත්වැසුම් හරහා ඉතා ශක්තිමත් බවත් සටහන් කළ යුතුය, එබැවින් ඔබේ දෑත් මත කාන්දු නොවන්න).

2.භාවිතා කරන ලද සියලුම පයිප්ප ඉඟි, EP නල, PCR නල සහ අනෙකුත් උපකරණ de-RNase ප්‍රතිකාර කළ යුතුය.එය 0.1% DEPC හි පොඟවා පසුව අධික පීඩනය යටතේ පීඩනය යෙදිය හැක.දුම් ආවරණයක් තුළ මෙහෙයුම කෙරෙහි අවධානය යොමු කරන්න.දේශීය කුරිරු පාලකයින්ට එන්සයිම ඉවත් කිරීම සඳහා පරිභෝජන ද්‍රව්‍ය කෙලින්ම මිලදී ගත හැකිය.

ප.ලි: කම්මැලි ක්‍රමයක් කියන්නම්.අධික උෂ්ණත්වය සහ අධික පීඩනය RNase සම්පූර්ණයෙන්ම ඉවත් කළ නොහැකි වුවද, එය විශාල කොටසක් ඉවත් කරනු ඇත.2 වතාවක් අධික උෂ්ණත්වය සහ අධික පීඩනය හොඳ බලපෑමක් ඇති කරයි, සහ RNA නිස්සාරණය සුළු බලපෑමක් ඇති කරයි.

3.ඇල්කොහොල් වලට ප්‍රෝටීන නැති කළ හැක,එබැවින් RNA නිස්සාරණ වගුව 75% ඇල්කොහොල් වලින් පිස දැමිය හැකිය , සහ අත්වැසුම් ද මත්පැන් සමග ඉසිය හැක.

4.අවසාන RNA ද්‍රාවණ ද්‍රාවණය සහ කේන්ද්‍රාපසාරී නළය ද de-RNase ප්‍රතිකාර කළ යුතුය.DEPC ජලය යනු බහුලව භාවිතා වන RNA ද්‍රාවණ ද්‍රාවණයකි.DEPC ජලය නිවැරදිව සකස් කිරීමේ ක්‍රමය ගැන කතා කරමු (ඔබ එය මිලදී ගන්නා විට වාණිජ DEPC නැවත ඇසුරුම් කිරීමට මතක තබා ගන්න)

1:1000 ට DEPC අතිශුද්ධ ජලයට එක් කරන්න, හොඳින් සොලවන්න, 37 ° C දී එක රැයකින් සිටීමට ඉඩ දෙන්න, සහ විනාඩි 15 ක් සඳහා ඉහළ උෂ්ණත්වය සහ ඉහළ පීඩනය යටතේ 121 ° C දී විෂබීජහරණය කරන්න.DEPC ජලය -20°C දී 1ml ඇල්කොට් වල ගබඩා කළ හැක.

අවසාන වශයෙන්, සාරාංශගත කිරීම සඳහා: අඩු උෂ්ණත්වය ප්රධාන වේ, පරිභෝජන ද්රව්ය හොඳින් හසුරුවනු ලැබේ, සම්පූර්ණයෙන්ම සන්නද්ධව සහ අඩු කතා!

හොඳයි, අද උපාය සඳහා එය එයයි.ඔබ සඳහන් කළ සියලුම RNA සාන්ද්‍රණය සහ සංශුද්ධතාවය මම ඔබට ප්‍රාර්ථනා කරමි.A260/A280 දෙකම 2.0 වේ!!!

ඇත්ත වශයෙන්ම, ඔබ භාවිතා කරන්නේ නම් aකාමර උෂ්ණත්ව මෙහෙයුම RNA නිස්සාරණ කට්ටලය, ඔබට ඉහත කරදරවලට මුහුණ දීමට සිදු නොවනු ඇත.

DNase එකතු නොකර කාමර උෂ්ණත්වයේ ක්‍රියා කිරීම මගින් සෛල වලින් සම්පූර්ණ RNA මිනිත්තු 11 කින් නිස්සාරණය කරන අතර මිනිත්තු 30 කින් සත්ව පටක හෝ ශාක වලින් සම්පූර්ණ RNA නිස්සාරණය කරයි.

අත්හදා බැලීමේ සාම්පල සඳහා, කරුණාකර සම්බන්ධ වන්න:overseas@foregene.com

ආශ්රිත නිෂ්පාදන:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/