(96-හොඳින්) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR කට්ටලය - Taqman
විස්තර
එම(96-හොඳින්) ඉක්මන් පහසුයිTM සෛල සෘජු RT-qPCR කට්ටලය–තක්මාන්සපයයිඅද්විතීය ලිසිස් බෆර පද්ධතියකිto ඉක්මනින් RNA නිදහස් කරන්නසංස්කෘතික සෛලයෙන්RT-qPCR ප්රතික්රියා සඳහා සාම්පල, කාලය ගතවන සහ වෙහෙසකාරී බව ඉවත් කරයිRNA පිරිසිදු කිරීමේ ක්‍රියාවලිය, සහ අවශ්‍ය RNA අච්චුව ලබා ගැනීමට ගත වන්නේ විනාඩි 7ක් පමණි.එම5× සෘජු RT මිශ්‍රණයසහ2× සෘජු qPCR මිශ්රණය-SYBRපෙට්ටියේ සපයා ඇති ඉක්මනින් සහඵලදායි ලෙස තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක ලබා ගැනීමPCR ප්රතිඵල.
5× Direct RT Mix සහ 2× Direct qPCR Mix-Taqman සතුව ප්‍රබල නිෂේධක ඉවසීමක් ඇති අතර, කාර්යක්ෂම ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම සහ නිශ්චිත විස්තාරණය සඳහා අච්චුවක් ලෙස පරීක්ෂා කිරීමට නියැදියේ ලයිසේට් භාවිතා කළ හැක.ප්‍රතික්‍රියාකාරකයේ RNA සඳහා ඉහළ බැඳීමක් සහිත Foregene අනන්‍ය ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් මෙන්ම Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl අඩංගු වේ.2 , ප්රතික්රියා බෆරය, PCR ප්‍රශස්තකරණය සහ ස්ථායීකාරකය , සහ නියැදිය ඉක්මනින්, පහසුවෙන් සහ නිවැරදිව හඳුනා ගැනීමට ලිසිස් බෆරය සමඟ ඒකාබද්ධව භාවිතා කළ හැකි අතර, එය ඉහළ සංවේදීතාව, ප්‍රබල නිශ්චිතභාවය සහ හොඳ ස්ථායීතාවයේ ලක්ෂණ ඇත.
කට්ටලය 96-හොඳින් වගා කරන ලද සෛලවල ක්ෂුද්‍ර-පද්ධති බිඳවැටීම ඉලක්ක කර ඇති අතර හොඳ ඒකාකාරී බවක් සහ අනුකූලතාවයක් ඇත;කට්ටල සංරචක මඟින් ලයිසිස් ප්රතික්රියා 96 ක්, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ ප්රතික්රියා 96 ක් සහ 96×2 qPCR ප්රතික්රියා සපයයි, එමඟින් ළිං 96 තහඩුව එක් වරක් භාවිතය සඳහා සපුරාලිය හැකි අතර, ප්රතික්රියාකාරක නැවත නැවත විවෘත කිරීම, කැටි කිරීම සහ දියවීම සහ ප්රතික්රියාකාරක ක්‍රියාකාරීත්වය පිරිහීම නිසා ඇති වන දූෂණය වළක්වා ගත හැකිය.
කට්ටල සංරචක
| කට්ටල සංයුතිය ( 50 μL ලිසිස් පද්ධතිය/20 μLRT ප්රතික්රියා පද්ධතිය /20μL qPCR ප්රතික්රියා පද්ධතිය) | DRT-03021 | සටහන් කරන්න | |
| 96T | |||
| කොටසI | බෆරයCL | 5 මිලි | සෛලයලිසිස් |
| පෙරනිමිතිProtease Plus II | 100 μL | ||
| බෆරයST | 500 μL | ||
| කොටස II | DNAමකනය | 100 μL | |
| 5× සෘජු RT මිශ්රණය | 400 μL | RT | |
| 2× සෘජු qPCR මිශ්රණය- තක්මාන් | මීටර් 1L × 2 | qPCR | |
| 50× ROX යොමු ඩයි | 400µL | ||
| RNase- නිදහස්ddH2 O | මිලි ලීටර් 1.7 |
| |
| Mවාර්ෂික | 1 කෑල්ලක් | 1 සේවය | |
*: ලයිසිස් ප්රතික්රියාකාරක DNA මකනය කට්ටලයේ II කොටසෙහි ඇතුළත් කර ඇත;Cell Lysis, RT, සහ qPCR සංරචක වෙන වෙනම මිලදී ගත හැක.
විශේෂාංග සහ වාසි
■සරල සහ ඵලදායී : Cell Direct RT තාක්ෂණය සමඟින්, RNA සාම්පල විනාඩි 7කින් ලබා ගත හැක.
■ නියැදි ඉල්ලුම කුඩා වන අතර, සෛල 10ක් තරම් අඩු ප්‍රමාණයක් පරීක්ෂා කළ හැක.
■ ඉහළ ප්‍රතිදානය: එය 384, 96, 24, 12, 6-ළිං තහඩු තුළ වගා කරන ලද සෛල තුළ RNA ඉක්මනින් හඳුනාගත හැකිය.
■ DNA මකනයට ඉක්මනින් මුදා හරින ලද ජෙනෝම ඉවත් කළ හැකි අතර, පසුකාලීන පර්යේෂණාත්මක ප්රතිඵල මත ඇති වන බලපෑම බෙහෙවින් අඩු කරයි.
■ ප්‍රශස්ත RT සහ qPCR පද්ධතිය මඟින් පියවර දෙකේ RT-PCR ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම වඩාත් කාර්යක්ෂම සහ PCR වඩාත් නිශ්චිත වන අතර RT-qPCR ප්රතික්රියා නිෂේධකවලට වඩා ප්‍රතිරෝධී කරයි.
කට්ටල යෙදුම
යෙදුමේ විෂය පථය: සංස්කෘතික සෛල.
- සාම්පල ලිසිස් මගින් නිකුත් කරන ලද RNA: මෙම කට්ටලයේ RT-qPCR අච්චුවට පමණක් අදාළ වේ.
- කට්ටලය පහත සඳහන් අරමුණු සඳහා භාවිතා කළ හැක: ජාන ප්‍රකාශන විශ්ලේෂණය, siRNA-මැදිහත් වූ ජාන නිශ්ශබ්ද කිරීමේ බලපෑම තහවුරු කිරීම, මත්ද්‍රව්‍ය පරීක්ෂා කිරීම යනාදිය.
ගබඩා කිරීම සහ කල් තබා ගැනීම
මෙම කට්ටලයේ I කොටස 4 හි ගබඩා කළ යුතුය℃;II කොටස -20℃ ගබඩා කළ යුතුය.
Foregene Protease Plus II 4 හි ගබඩා කළ යුතුය℃, -20℃ හි කැටි නොකරන්න.
ප්රතික්රියාකාරක 2×සෘජු qPCR Mix-Taqman -20 හි ගබඩා කළ යුතුය℃අඳුරේ;නිතර භාවිතා කරන්නේ නම්, එය 4 හි ගබඩා කළ හැකියකෙටි කාලීන ගබඩා කිරීම සඳහා ℃ (දින 10ක් ඇතුළත භාවිතා කරන්න).
රියල් ටයිම් PCR ප්‍රයිමර් සැලසුම් මූලධර්ම
Forward Primer සහ Reverse Primer
රියල් ටයිම් PCR සඳහා, ප්‍රාථමික නිර්මාණය ඉතා වැදගත් වේ.ප්‍රයිමර් PCR විස්තාරණයේ විශේෂත්වය සහ කාර්යක්ෂමතාවයට සම්බන්ධ වන අතර පහත සඳහන් මූලධර්මවලට අදාළව නිර්මාණය කළ හැක:
- ප්‍රාථමික දිග: 18-30bp.
- GC අන්තර්ගතය: 40-60%.
- Tm අගය: Primer 5 වැනි ප්‍රයිමර් නිර්මාණ මෘදුකාංග, ප්‍රාථමිකයේ Tm අගය ලබා දිය හැක.ඉහළ සහ පහළ ප්‍රාථමික වල Tm අගයන් හැකි තරම් සමීප විය යුතුය.Tm ගණනය කිරීමේ සූත්‍රය ද භාවිතා කළ හැක: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR සිදු කරන විට, ප්‍රාථමික Tm අගය 5 °C ට වඩා අඩු උෂ්ණත්වයක් සාමාන්‍යයෙන් annealing උෂ්ණත්වය ලෙස තෝරා ගනු ලැබේ (නිවාරණ උෂ්ණත්වයේ අනුරූප වැඩි වීම PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ විශේෂත්වය වැඩි කළ හැක).
- ප්‍රයිමර් සහ PCR නිෂ්පාදන:
- සැලසුම් ප්‍රයිමර් PCR විස්තාරණ නිෂ්පාදන දිග වඩාත් සුදුසු වන්නේ 100-150bp වේ.
- සැකිල්ලේ ද්විතියික ව්‍යුහාත්මක ප්‍රදේශයේ සැලසුම් ප්‍රයිමර් හැකිතාක් දුරට වැළැක්විය යුතුය.
- ඉහළ සහ පහළ ප්‍රයිමර් වල 3′ අන්ත අතර අනුපූරක පාද 2ක් හෝ වැඩි ගණනක් සෑදීමෙන් වළකින්න.
- ප්‍රයිමර් 3′ පර්යන්ත පාදය අතිරේක අනුගාමී G හෝ C 3ක් සමඟ පැවතිය නොහැක.
- ප්‍රයිමර් වලට අනුපූරක ව්‍යුහයන් තිබිය නොහැක, එසේ නොමැතිනම් හිසකෙස් ව්‍යුහයක් සාදනු ඇත, එය PCR විස්තාරණයට බලපායි.
- ATCG ප්‍රාථමික අනුපිළිවෙලෙහි හැකිතාක් ඒකාකාරව බෙදා හැරිය යුතු අතර, 3′ පර්යන්ත පදනම T ලෙස වැළැක්විය යුතුය.
උපග්රන්ථය1: සීell සෘජුRT-qPCR කට්ටලයt අතිරේක ඇසුරුම
1.සෛල ලිසිස් විසඳුම
| සෛල ලයිසිස් විසඳුම | |||
| කට්ටල සංරචක (24-ළිං ලයිසිස් පද්ධතිය / ළිඳ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| ටී 100 | ටී 500 | ||
| කොටසමම | බෆර් CL | 20 මිලි | මිලි ලීටර් 100 යි |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| බෆර් ST | 1 ml × 2 | 10 මිලි | |
| කොටසII | DNA මකනය | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT මිශ්රණය | |
| කට්ටල සංරචක (20 μl ප්රතික්රියා පද්ධතිය) | DRT-01011-B1 |
| ටී 200 | |
| 5× සෘජු RT මිශ්රණය | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR මිශ්රණය | ||
| කට්ටල සංරචක (20 μl ප්රතික්රියා පද්ධතිය) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| ටී 200 | ටී 1000 | |
| 2× සෘජු qPCR මික්ස්-ටක්මන් | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX යොමු ඩයි | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 මිලි | 10 මිලි |
උපදෙස් අත්පොත්:
