Escherichia coli O157:H7 න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය (PCR ප්‍රතිදීප්ත පරීක්ෂණ ක්‍රමය)
කට්ටල විස්තරය:
Cat.No.FP102
එය ආහාර, ආහාර, ජල සාම්පල සහ පාරිසරික සාම්පලවල E. coli O157:H7 ඉක්මනින් හඳුනා ගැනීම සහ පරීක්ෂා කිරීම සඳහා යොදා ගනී.
විස්තර
එය ආහාර, ආහාර, ජල සාම්පල සහ පාරිසරික සාම්පලවල E. coli O157:H7 ඉක්මනින් හඳුනා ගැනීම සහ පරීක්ෂා කිරීම සඳහා යොදා ගනී.
[පරීක්ෂණ මූලධර්මය]ප්‍රතිදීප්ත PCR තාක්‍ෂණයේ මූලධර්මය අනුව, විශේෂිත ප්‍රයිමර් සහ ටක්මන් ගවේෂණ Escherichia coli O157: H7 හි නිශ්චිත ජානය සඳහා නිර්මාණය කර ඇති අතර, Escherichia coli O157: H7 DNA වල ගුණාත්මක හඳුනාගැනීම හඳුනාගැනීම සඳහා ප්‍රතිදීප්ත PCR උපකරණයක් මගින් අනාවරණය කරගනු ලැබේ.
කට්ටල අන්තර්ගතය
සටහන: ROX නාලිකා පරීක්ෂණය ඇතුළත් නොවේ.
| Cවිරුද්ධවාදීන් | පිරිවිතර | Qunantity |
| බෆර් ඒ | නළය | 1 |
| බෆර් බී | නළය | 1 |
| ධනාත්මක පාලනය | නළය | 1 |
| සෘණ පාලනය | නළය | 1 |
අපේක්ෂිත භාවිතය
සඳහා භාවිතා වේ ආහාර, ආහාර, ජල සාම්පල සහ පාරිසරික සාම්පලවල E. coli O157:H7 ඉක්මනින් හඳුනා ගැනීම සහ පරීක්ෂා කිරීම.
ගබඩා කොන්දේසි සහ කල් ඉකුත්වන දිනය
අඳුරේ -20℃ ගබඩා කර නැවත නැවත කැටි කිරීම සහ දියවීම වළක්වා ගන්න.
වලංගු කාලය 12 කිමාස, සහ නිෂ්පාදන දිනය පිටත ඇසුරුම් මත පෙන්වා ඇත.
උපකරණ සහ පරිභෝජන භාණ්ඩ
ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණය, පයිප්ප තුවක්කුව සහ ගැලපෙන ඉඟි, වෝටෙක්ස් ෂේකර්, කුඩා කේන්ද්රාපසාරී.
භාවිතය
1. නියැදි සැකසීම
1.1 නියැදි වර්ගය: මෙම කට්ටලය Escherichia coli O157:H7 මගින් අපවිත්‍ර වූ බවට සැක කෙරෙන ආහාර, ආහාර, ජල සාම්පල සහ අනෙකුත් සාම්පල සඳහා සුදුසු වේ.ගැඹුරු සකසන ලද මස් නිෂ්පාදන, පාන වර්ග සහ වර්ණක අඩංගු අනෙකුත් ද්‍රව්‍ය සඳහා, ප්‍රතිදීප්ත සංඥා එකතුවට බලපෑම් නොකිරීමට ඒවා සේදිය යුතුය.
1.2 නියැදි සැකසීම: Escherichia coli O157: H7 නියැදි සකස් කිරීම, පොහොසත් කිරීම සංස්කෘතිය සහ හුදකලා කිරීම සඳහා "GB 4789.10-2016 ආහාර සුරක්ෂිතතා ජාතික සම්මත Escherichia coli O157 හි ආහාර ක්ෂුද්ර ජීව විද්‍යාත්මක පරීක්ෂණය: H7 පරීක්ෂණය" වෙත යොමු වන්න.
- Nucleic අම්ලය නිස්සාරණය
මිලිලීටර් 1.5ක කේන්ද්රාපසාරී නලයකට මිලිලීටර් 20ක් පොහොසත් කිරීමේ ද්‍රාවණයක් ගෙන ක්ෂුද්ර ජීවී ලයිසේට් 200 μL (අමතර කට්ටලයක් අවශ්‍ය වේ), තත්පර 30ක් සුලිය, කෙටියෙන් කේන්ද්රාපසාරී කර පසෙකින් තබන්න.
සටහන්: ලයිසේට් වලින් නියුක්ලෙයික් අම්ලය නිස්සාරණය කිරීම විනාඩි 10 ක් ඇතුළත අවසන් කළ යුතු අතර, දිගු කාලයක් ගබඩා කළ නොහැක.
3. න්යෂ්ටික අම්ල විස්තාරණය
3.1 භාවිතය සඳහා ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණය ක්‍රියාත්මක කරන්න.
කට්ටලයෙන් බෆර් A සහ Buffer , ඒවා හොඳින් උණු කර, කෙටියෙන් කේන්ද්රාපසාරී කරන්න.එක් එක් PCR ප්‍රතික්‍රියා නලයට 18 μL බෆර A සහ 2 μL බෆර B එක් කරන්න.ඉන්පසු PCR ප්‍රතික්‍රියා නලවලට සෘණ පාලනය, නිස්සාරණය කරන ලද න්යෂ්ටික අම්ලය සහ ධන පාලනයෙන් මිලි ලීටර් 5 බැගින් එකතු කරන්න, නල ආවරණය කරන්න, සහ කේන්ද්රාපසාරී කෙටියෙන් කරන්න.
3.3 PCR ප්‍රතික්‍රියා නළය ප්‍රතිදීප්ත PCR යන්ත්‍රයකට මාරු කර, විස්තාරණ අත්හදා බැලීම් සිදු කිරීමට පහත ක්‍රියා පටිපාටි භාවිතා කරන්න: ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතිය සඳහා 25 mL තෝරන්න, එක් එක් චක්‍රය සඳහා 60 ° C දී ප්‍රතිදීප්ත සංඥා එකතු කරන්න, සහ හඳුනාගැනීමේ නාලිකාව සඳහා FAM තෝරන්න.
| පියවර | වැඩසටහන | චක්‍ර ගණන |
| 1 | 37℃ විනාඩි 5 | 1 |
| 2 | විනාඩි 95 ℃ 3 | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (ප්රතිදීප්තතාව එකතු කරන්න) |
ගැටළු විශ්ලේෂණය සඳහා මාර්ගෝපදේශ
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNA නිස්සාරණය කළ නොහැක හෝ නියුක්ලික් අම්ලයේ අස්වැන්න අඩු වේ
සාමාන්‍යයෙන් ප්‍රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාවයට බලපාන බොහෝ සාධක ඇත, එනම්: නියැදි RNA අන්තර්ගතය, ක්‍රියාත්මක වන ක්‍රමය, ඉවත් කිරීමේ පරිමාව යනාදිය.
පොදු හේතු විශ්ලේෂණය:
1.අයිස් බාත් හෝ අඩු-උෂ්ණත්ව (4 ° C) ක්‍රියාන්විතයේදී කේන්ද්රාපසාරී කිරීම.
යෝජනාව: කාමර උෂ්ණත්වය (15-25 ° C) මෙහෙයුම, කිසි විටෙකත් අයිස් ස්නානය සහ අඩු උෂ්ණත්ව කේන්ද්රාපසාරී.
2. නුසුදුසු නියැදි ගබඩා කිරීම හෝ සාම්පල ගබඩා කිරීම දිගු කාලයක්.
යෝජනාව: -80 ° C දී සාම්පල ගබඩා කිරීම හෝ ද්රව නයිට්රජන් තුළ කැටි කිරීම, සහ නැවත නැවත කැටි කිරීම-දියවන භාවිතය වැළැක්වීම;RNA නිස්සාරණය සඳහා අලුතින් එකතු කරන ලද සාම්පල භාවිතා කිරීමට උත්සාහ කරන්න.
3.ප්‍රමාණවත් නොවන නියැදි ලයිසිස්
නිර්දේශය: කරුණාකර නියැදිය සහ ක්‍රියාකාරී ද්‍රාවණය (රේඛීය ඇක්‍රිලමයිඩ්) තරයේ මිශ්‍ර කර කාමර උෂ්ණත්වයේ දී (15-25 ° C) විනාඩි 10 ක් පුර්වගත කර ඇති බවට සහතික වන්න.
4.ප්‍රවාහකය වැරදි ලෙස එකතු කර ඇත
නිර්දේශය: පිරිසිදු කිරීමේ තීරුවේ පටලයේ මැදට RNase-Free ddH2O එකතු කර ඇති බවට වග බලා ගන්න
5.Buffer viRW2 හි නිර්ජලීය එතනෝල් වැරදි පරිමාව
යෝජනාව: කරුණාකර උපදෙස් අනුගමනය කරන්න, බෆර් viRW2 වෙත නිර්ජලීය එතනෝල් නිවැරදි පරිමාව එකතු කර කට්ටලය භාවිතා කිරීමට පෙර ඒවා හොඳින් මිශ්‍ර කරන්න.
6.අයුතු සාම්පල භාවිතය.
යෝජනාව: Buffer viRL 500μl ට සාම්පල 200µl.අධික නියැදි පරිමාව RNA නිස්සාරණ අනුපාතය අඩු වීමට හේතු වේ.
7.අනවද්‍ය එලියුෂන් පරිමාව හෝ අසම්පූර්ණ එලියුෂන්.
යෝජනාව: පවිත්ර කිරීමේ තීරුවේ elluent පරිමාව 30-50μl;ඉවත් කිරීමේ බලපෑම සතුටුදායක නොවේ නම්, පෙර රත් කළ RNase-Free ddH එකතු කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.2O සහ 5-10min වැනි කාමර උෂ්ණත්වයේ තැබීමේ කාලය දීර්ඝ කරන්න
8.Buffer viRW2 හි සේදීමෙන් පසු පිරිසිදු කිරීමේ තීරුවේ එතනෝල් අවශේෂ ඇත.
යෝජනාව: Buffer viRW2 සහ හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී මිනිත්තු 2ක් තුළ සේදීමෙන් පසුවද එතනෝල් ඉතිරිව තිබේ නම්, ඉතිරි එතනෝල් සම්පූර්ණයෙන්ම ඉවත් කිරීම සඳහා පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී කිරීමෙන් පසු විනාඩි 5ක් කාමර උෂ්ණත්වයේ තැබිය හැක.
පිරිසිදු RNA අණු වල ක්ෂය වීම
පිරිසිදු කරන ලද RNA වල ගුණාත්මකභාවය නියැදි ගබඩා කිරීම, RNase දූෂණය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය වැනි සාධකවලට සම්බන්ධ වේ.
පොදු හේතු විශ්ලේෂණය:
1. එකතු කරන ලද සාම්පල නියමිත වේලාවට සුරැකී නැත.
යෝජනාව: එකතු කිරීමෙන් පසු නියැදිය නියමිත වේලාවට භාවිතා නොකරන්නේ නම්, කරුණාකර එය වහාම -80 ℃ හෝ දියර නයිට්රජන් ගබඩා කරන්න.RNA අණු නිස්සාරණය සඳහා, හැකි සෑම විටම නැවුම් ලෙස එකතු කරන ලද සාම්පල භාවිතා කිරීමට උත්සාහ කරන්න.
2. එකතු කරන ලද සාම්පල නැවත නැවතත් කැටි වී දියවෙමින් පැවතුනි.
යෝජනාව: නියැදි එකතු කිරීම සහ ගබඩා කිරීමේදී නැවත නැවත කැටි කිරීම සහ දියවීම (එක් වරකට වඩා වැඩි නොවේ) වළක්වන්න, එසේ නොවුවහොත් න්යෂ්ටික අම්ලයේ අස්වැන්න අඩු වේ.
3.RNase ශල්‍යාගාරයේදී හඳුන්වා දී ඇති අතර හෝ ඉවත දැමිය හැකි අත්වැසුම්, වෙස් මුහුණු ආදිය පැළඳ සිටියේ නැත.
යෝජනාව: RNA අණු නිස්සාරණය කිරීම වඩාත් හොඳින් සිදු කරනු ලබන්නේ වෙනම RNA මෙහෙයුම් කාමරයක වන අතර අත්හදා බැලීමට පෙර පරීක්ෂණ වගුව පිරිසිදු කෙරේ.RNase හඳුන්වාදීම නිසා ඇතිවන RNA ක්ෂය වීම වළක්වා ගැනීම සඳහා අත්හදා බැලීමේදී ඉවත දැමිය හැකි අත්වැසුම් සහ වෙස්මුහුණු පළඳින්න.
4.ප්‍රතික්‍රියාකාරකය භාවිතයේදී RNase මගින් දූෂිත වේ.
යෝජනාව: අදාළ අත්හදා බැලීම් සඳහා නව වෛරස් RNA හුදකලා කට්ටලයක් සමඟ ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න.
5. කේන්ද්රාපසාරී නල, පයිප්ප ඉඟි, ආදියෙහි RNase දූෂණය. යෝජනාව: කේන්ද්රාපසාරී නල, පයිප්ප ඉඟි සහ පයිප්ප සියල්ලම RNase-නිදහස් බව සහතික කර ගන්න.
පිරිපහදු කළ RNA අණු පහළ ගංවතුර අත්හදා බැලීම්වලට බලපෑවේය
පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව මගින් පිරිසිදු කරන ලද RNA අණු, ලුණු අයන හෝ ප්‍රෝටීන් ඕනෑවට වඩා තිබේ නම්, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම, උතුරු බ්ලොට්, යනාදී ලෙස පහළ පර්යේෂණවලට බලපානු ඇත.
1. ඉවත් කරන ලද RNA අණු වල ඉතිරි ලුණු අයන පවතී.
නිර්දේශය: නිර්ජලීය එතනෝල් වල නිවැරදි පරිමාව Buffer viRW2 වෙත එකතු කර ඇති බවට වග බලා ගන්න, සහ මෙහෙයුම් උපදෙස් මත නිවැරදි කේන්ද්රාපසාරී වේගයට අනුව පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව දෙවරක් සෝදන්න.ඉන්පසු ලවණ අයන දූෂණය උපරිමයෙන් ඉවත් කිරීමට කේන්ද්රාපසාරී කරන්න
2. ඉවත් කරන ලද RNA අණු වල ඉතිරි එතනෝල් පවතී
යෝජනාව: Buffer viRW2 මගින් පිරිසිදු කිරීමේ තීරු සෝදා ඇති බව තහවුරු කළ පසු, මෙහෙයුම් උපදෙස් මත කේන්ද්රාපසාරී වේගය අනුව හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී කිරීම සිදු කරන්න.එතනෝල් තවමත් ඉතිරිව තිබේ නම්, එය හිස් නල කේන්ද්රාපසාරී කිරීමෙන් පසු කාමර උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 5 ක් ඉතිරිව ඇති එතනෝල් උපරිමයෙන් ඉවත් කළ හැකිය.
උපදෙස් අත්පොත්:
වෛරස් RNA හුදකලා කට්ටල උපදෙස් අත්පොත
