ගැටළු විශ්ලේෂණය සඳහා මාර්ගෝපදේශ

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

RNA නිස්සාරණය කළ නොහැක හෝ නියුක්ලික් අම්ලයේ අස්වැන්න අඩු වේ

සාමාන්‍යයෙන් ප්‍රතිසාධන කාර්යක්ෂමතාවයට බලපාන බොහෝ සාධක ඇත, එනම්: නියැදි RNA අන්තර්ගතය, ක්‍රියාත්මක වන ක්‍රමය, ඉවත් කිරීමේ පරිමාව යනාදිය.

පොදු හේතු විශ්ලේෂණය:

1.අයිස් බාත් හෝ අඩු-උෂ්ණත්ව (4 ° C) ක්‍රියාන්විතයේදී කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීම.

යෝජනාව: කාමර උෂ්ණත්වය (15-25 ° C) මෙහෙයුම, කිසි විටෙකත් අයිස් ස්නානය සහ අඩු උෂ්ණත්ව කේන්ද්රාපසාරී.

2. නුසුදුසු නියැදි ගබඩා කිරීම හෝ සාම්පල ගබඩා කිරීම දිගු කාලයක්.

යෝජනාව: -80 ° C දී සාම්පල ගබඩා කිරීම හෝ ද්රව නයිට්රජන් තුළ කැටි කිරීම, සහ නැවත නැවත කැටි කිරීම-දියවන භාවිතය වැළැක්වීම;RNA නිස්සාරණය සඳහා අලුතින් එකතු කරන ලද සාම්පල භාවිතා කිරීමට උත්සාහ කරන්න.

3.ප්‍රමාණවත් නොවන නියැදි ලයිසිස්

නිර්දේශය: කරුණාකර නියැදිය සහ ක්‍රියාකාරී ද්‍රාවණය (රේඛීය ඇක්‍රිලමයිඩ්) තරයේ මිශ්‍ර කර කාමර උෂ්ණත්වයේ දී (15-25 ° C) විනාඩි 10 ක් පුර්වගත කර ඇති බවට සහතික වන්න.

4.ප්‍රවාහකය වැරදි ලෙස එකතු කර ඇත

නිර්දේශය: පිරිසිදු කිරීමේ තීරුවේ පටලයේ මැදට RNase-Free ddH2O එකතු කර ඇති බවට වග බලා ගන්න

5.Buffer viRW2 හි නිර්ජලීය එතනෝල් වැරදි පරිමාව

යෝජනාව: කරුණාකර උපදෙස් අනුගමනය කරන්න, බෆර් viRW2 වෙත නිර්ජලීය එතනෝල් නිවැරදි පරිමාව එකතු කර කට්ටලය භාවිතා කිරීමට පෙර ඒවා හොඳින් මිශ්‍ර කරන්න.

6.අයුතු සාම්පල භාවිතය.

යෝජනාව: Buffer viRL 500μl ට සාම්පල 200µl.අධික නියැදි පරිමාව RNA නිස්සාරණ අනුපාතය අඩු වීමට හේතු වේ.

7.අනවද්‍ය එලියුෂන් පරිමාව හෝ අසම්පූර්ණ එලියුෂන්.

යෝජනාව: පවිත්ර කිරීමේ තීරුවේ elluent පරිමාව 30-50μl;ඉවත් කිරීමේ බලපෑම සතුටුදායක නොවේ නම්, පෙර රත් කළ RNase-Free ddH එකතු කිරීම නිර්දේශ කෙරේ.₂O සහ 5-10min වැනි කාමර උෂ්ණත්වයේ තැබීමේ කාලය දීර්ඝ කරන්න

8.Buffer viRW2 හි සේදීමෙන් පසු පිරිසිදු කිරීමේ තීරුවේ එතනෝල් අවශේෂ ඇත.

යෝජනාව: Buffer viRW2 සහ හිස් නල කේන්ද්‍රාපසාරී මිනිත්තු 2ක් තුළ සේදීමෙන් පසුවද එතනෝල් ඉතිරිව තිබේ නම්, ඉතිරි එතනෝල් සම්පූර්ණයෙන්ම ඉවත් කිරීම සඳහා පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව හිස් නල කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීමෙන් පසු විනාඩි 5ක් කාමර උෂ්ණත්වයේ තැබිය හැක.

පිරිසිදු RNA අණු වල ක්ෂය වීම

පිරිසිදු කරන ලද RNA වල ගුණාත්මකභාවය නියැදි ගබඩා කිරීම, RNase දූෂණය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය වැනි සාධකවලට සම්බන්ධ වේ.

පොදු හේතු විශ්ලේෂණය:

1. එකතු කරන ලද සාම්පල නියමිත වේලාවට සුරැකී නැත.

යෝජනාව: එකතු කිරීමෙන් පසු නියැදිය නියමිත වේලාවට භාවිතා නොකරන්නේ නම්, කරුණාකර එය වහාම -80 ℃ හෝ දියර නයිට්‍රජන් ගබඩා කරන්න.RNA අණු නිස්සාරණය සඳහා, හැකි සෑම විටම නැවුම් ලෙස එකතු කරන ලද සාම්පල භාවිතා කිරීමට උත්සාහ කරන්න.

2. එකතු කරන ලද සාම්පල නැවත නැවතත් කැටි වී දියවෙමින් පැවතුනි.

යෝජනාව: නියැදි එකතු කිරීම සහ ගබඩා කිරීමේදී නැවත නැවත කැටි කිරීම සහ දියවීම (එක් වරකට වඩා වැඩි නොවේ) වළක්වන්න, එසේ නොවුවහොත් න්‍යෂ්ටික අම්ලයේ අස්වැන්න අඩු වේ.

3.RNase ශල්‍යාගාරයේදී හඳුන්වා දී ඇති අතර හෝ ඉවත දැමිය හැකි අත්වැසුම්, වෙස් මුහුණු ආදිය පැළඳ සිටියේ නැත.

යෝජනාව: RNA අණු නිස්සාරණය කිරීම වඩාත් හොඳින් සිදු කරනු ලබන්නේ වෙනම RNA මෙහෙයුම් කාමරයක වන අතර අත්හදා බැලීමට පෙර පරීක්ෂණ වගුව පිරිසිදු කෙරේ.RNase හඳුන්වාදීම නිසා ඇතිවන RNA ක්ෂය වීම වළක්වා ගැනීම සඳහා අත්හදා බැලීමේදී ඉවත දැමිය හැකි අත්වැසුම් සහ වෙස්මුහුණු පළඳින්න.

4.ප්‍රතික්‍රියාකාරකය භාවිතයේදී RNase මගින් දූෂිත වේ.

යෝජනාව: අදාළ අත්හදා බැලීම් සඳහා නව වෛරස් RNA හුදකලා කට්ටලයක් සමඟ ප්‍රතිස්ථාපනය කරන්න.

5. කේන්ද්රාපසාරී නල, පයිප්ප ඉඟි, ආදියෙහි RNase දූෂණය. යෝජනාව: කේන්ද්රාපසාරී නල, පයිප්ප ඉඟි සහ පයිප්ප සියල්ලම RNase-නිදහස් බව සහතික කර ගන්න.

පිරිපහදු කළ RNA අණු පහළ ගංවතුර අත්හදා බැලීම්වලට බලපෑවේය

පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව මගින් පිරිසිදු කරන ලද RNA අණු, ලුණු අයන හෝ ප්‍රෝටීන් ඕනෑවට වඩා තිබේ නම්, ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම, උතුරු බ්ලොට්, යනාදී ලෙස පහළ පර්යේෂණවලට බලපානු ඇත.

1. ඉවත් කරන ලද RNA අණු වල ඉතිරි ලුණු අයන පවතී.

නිර්දේශය: නිර්ජලීය එතනෝල් වල නිවැරදි පරිමාව Buffer viRW2 වෙත එකතු කර ඇති බවට වග බලා ගන්න, සහ මෙහෙයුම් උපදෙස් මත නිවැරදි කේන්ද්‍රාපසාරී වේගයට අනුව පිරිසිදු කිරීමේ තීරුව දෙවරක් සෝදන්න.ඉන්පසු ලවණ අයන දූෂණය උපරිමයෙන් ඉවත් කිරීමට කේන්ද්‍රාපසාරී කරන්න

2. ඉවත් කරන ලද RNA අණු වල ඉතිරි එතනෝල් පවතී

යෝජනාව: Buffer viRW2 මගින් පිරිසිදු කිරීමේ තීරු සෝදා ඇති බව තහවුරු කළ පසු, මෙහෙයුම් උපදෙස් මත කේන්ද්‍රාපසාරී වේගය අනුව හිස් නල කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීම සිදු කරන්න.එතනෝල් තවමත් ඉතිරිව තිබේ නම්, එය හිස් නල කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීමෙන් පසු කාමර උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 5 ක් ඉතිරිව ඇති එතනෝල් උපරිමයෙන් ඉවත් කළ හැකිය.

උපදෙස් අත්පොත්:

වෛරස් RNA හුදකලා කට්ටල උපදෙස් අත්පොත