සෘජු RT-qPCR කට්ටලය III
කට්ටල විස්තරය:
◮Direct RT-qPCR Kit, Foreasy Reverse Transcriptase සහ Foreasy HS Taq DNA Polymerase මගින් සංවර්ධනය කරන ලද, අද්විතීය ප්රතික්රියා බෆරයක් සමඟින්, මෙම කට්ටලය ශක්තිමත් ප්‍රතිරෝධයක් සහ ගැළපීමක් ඇති කරයි, සහ එයට ප්රතික්රියා භාවිතා කරන Foregene Lysis පද්ධතිය අච්චුවක් ලෙස සෘජුවම පරීක්ෂා කළ හැකිය.මෙම කට්ටලය COVID-19 න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය සහ අනෙකුත් ව්යාධිජනක බැක්ටීරියා න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය සංවර්ධනය සඳහා යෙදිය හැක.
විස්තර
සෘජු RT-qPCR කට්ටලය වෙනම ඇසුරුම් කරන ලද RT-qPCR බෆරය (Foreasy HS Taq DNA පොලිමරේස් මිශ්‍ර සහිත) සහ ඉහළ කාර්යක්ෂම වේ.Foreasy Reverse Transscriptase(MMLV),සරල සත්‍යාපනයක් තුළ පසුපස-අන්ත කට්ටල නිර්මාණය කිරීම සහ පද්ධති ගැලපීම සඳහා එය පහසු කරවයි.
Direct RT-qPCR Kit, Foreasy Reverse Transcriptase සහ Foreasy HS Taq DNA Polymerase මගින් සංවර්ධනය කරන ලද, අද්විතීය ප්රතික්රියා බෆරයක් සමඟින්, මෙම කට්ටලය ශක්තිමත් ප්‍රතිරෝධයක් සහ ගැළපීමක් ඇති කරයි, සහ එයට ප්රතික්රියා භාවිතා කරන Foregene Lysis පද්ධතිය අච්චුවක් ලෙස සෘජුවම පරීක්ෂා කළ හැකිය.මෙම කට්ටලය COVID-19 න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය සහ අනෙකුත් ව්යාධිජනක බැක්ටීරියා න්යෂ්ටික අම්ල හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය සංවර්ධනය සඳහා යෙදිය හැක.
මෙම කට්ටලය සෘජුවම IVD නිෂ්පාදනයේ සංරචකය විය හැක, පහසුවෙන් සහ වේගවත් ලෙස භාවිතා කරයි.එය නැවත සංවර්ධනය නොකර, පහසු සත්‍යාපනය පමණක් අවශ්‍ය වේ.
පිරිවිතර
500T, 50,000T
කට්ටල සංරචක
| කට්ටලයේ අන්තර්ගතය (20 μL ප්රතික්රියා පද්ධතිය) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| ටී 500 | 50,000 ටී | |
| ෆොරෙසි ආර්everse Transscriptase(200 U/μL) | 50 μL× 1 | 1 මිලි× 5 |
| 2× සෘජු qPCRමික්ස්-ටක්මන් | මිලි ලීටර් 1 × 5 | මිලි ලීටර් 500 යි× 1 |
| උපදෙස් | 1 | 1 |
මෙහෙයුම් පියවර
A: සැකිල්ල සහ ප්‍රතික්‍රියාකාරකය සකස් කිරීම
1. සකස් කරන ලද RNA අච්චුව (RNA අච්චුව නිස්සාරණය කිරීමට සහ පිරිසිදු කිරීමට Foregene Total RNA Isolation Kit series kit භාවිතා කිරීම නිර්දේශ කෙරේ) හෝ නියැදි ඉරිතැලීම් නිෂ්පාදන ( Foregene Lysis පද්ධතිය භාවිතා කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ), විශේෂිත ප්‍රයිමර් (10 μM) සහ අනෙකුත් අදාළ පරිභෝජන ද්‍රව්‍ය, උපකරණ.
2. 2× Direct RT-qPCR බෆරය, RNase-Free ddH2O සහ 20× ROX Reference Dye (එය අවශ්‍ය නම්) අයිස් සහිත පෙට්ටියට දමන්න, මේවා ස්වභාවිකව දිය වී මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කරන්න.
B: RT-qPCR පද්ධතිය සකස් කිරීම
ප්රතික්රියා පද්ධතියේ ප්රතික්රියා බෆරයේ පරිමාවෙන් අඩක් ලබා ගන්න (උදාහරණයක් ලෙස, පද්ධතියේ පරිමාව 20 μL නම්, එයට 10 μL 2× සෘජු RT-qPCR බෆරය ලබා ගත යුතුය.). සදහාඅනුරූප එන්සයිම ප්රමාණය, අපි එය යෝජනා කරමුM-MLV: 10-30 U/20 μL ප්රතික්රියා පද්ධතිය,ටැක්DNA පොලිමරේස්：1-2 U/20 μL ප්රතික්රියා පද්ධතියමෙය අපගේ යෝජනාවයි, ඔබ එය පරීක්ෂා කර සකස් කළ යුතුය), RNA සැකිල්ල, විශේෂිත ප්‍රයිමර් සහ පරීක්ෂණ එකතු කරන්න, සහ RNase-Free ddH එකතු කරන්න2O සිට 20 μL.RT-qPCR ප්රතික්රියා පද්ධතියේ නිශ්චිත සූදානම පහත වගුව 1 වෙත යොමු කළ හැක.
වගුව 1 : RT-qPCR පද්ධතිය සකස් කිරීම
| සංරචකය | පරිමාව | අවසාන සාන්ද්රණය |
| 2× සෘජු RT-qPCR බෆරය | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transscriptase(MMLV) | 10-30 යූ | |
| Foreasy HS Taq DNA පොලිමරේස් | 1-2 යූ | |
| Forward Primer (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| ප්‍රතිලෝම ප්‍රයිමර් (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| පරීක්ෂණය (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| සැකිල්ල (RNA හෝ Lysate) | X μL | |
| 20× ROX යොමු ඩයි | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| මුළු පරිමාව | 20 μL |
සටහන: ඉදිරි ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රතිලෝම ප්‍රයිමර් ඉලක්ක ජානයේ විශේෂිත ප්‍රයිමර් වේ.qPCR හි පද්ධතිය ප්‍රායෝගික පර්යේෂණාත්මක සහ PCR ආකෘති අනුව සකස් කළ හැක.බොහෝ ප්‍රයිමර් වල අවසාන සාන්ද්රණය සඳහා අපි 400nM නිර්දේශ කරමු.කරුණාකර සකස් කරන ලද සාන්ද්රණය සහ නිර්දේශිත අවසාන සාන්ද්රණය අනුව නිශ්චිත ප්‍රයිමර් සහ පරීක්ෂණවල පරිමාව සකසන්න.
1*: විවිධ ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණ අනුව ROX Reference Dye වල සුදුසු අවසාන සාන්ද්රණය තෝරන්න.පොදු ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණවල ප්‍රශස්ත ROX යොමු සායම් සාන්ද්රණය පහත වගුවේ දැක්වේ:
| ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණ | ROX Reference Dye හි අවසාන සාන්ද්රණය |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/පියවර පළමු,ආදිය | 1× (උදාහරණයක් ලෙස, 20 μL ප්රතික්රියා පද්ධතියේ 1μl 20×ROX සමුද්දේශ ඩයි එකතු කරන්න) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P සහ Mx4000, ආදිය. | 0.5× (උදාහරණයක් ලෙස, 20 μL ප්රතික්රියා පද්ධතියේ 0.5μl 20×ROX සමුද්දේශ ඩයි එකතු කරන්න) |
| Roche PCR උපකරණය, Bio-Rad PCR උපකරණය, Eppendorf ප්‍රමාණාත්මක PCR උපකරණය, ආදිය. | ROX Reference Dye නොමැතිව |
ගබඩා කිරීම සහ කල් තබා ගැනීම
කට්ටලය -20 ± 5℃ ගබඩා කළ යුතුය.එය වහාම -20℃ තාප ස්ථායී ශීතකරණයක් තුළ ගබඩා කළ යුතුය.එය සුදුසු තත්ත්වයේ ගබඩා කර ඇත්නම් වලංගු කාලය වසර 2 කි.
