ForDirect RT-qPCR කට්ටලය
කට්ටල විස්තරය:
◮RNA පිරිසිදු කිරීමේ ක්‍රියාවලීන් නොමැතිව ස්පුබ් එකතුවෙන් RNA සෘජු තත්‍ය කාලීන විස්තාරණය සඳහා.මෙම කට්ටලය පැයක් ඇතුළත qRT-PCR චක්‍ර සම්පූර්ණ කරයි.එන්සයිම මිශ්රණය යනු Reverse Transcriptase, Hot-Start Taq DNA පොලිමරේස්, RNase inhibitor වල ප්‍රශස්ත මිශ්‍රණයකි.ප්රතික්රියා බෆරයේ ප්‍රශස්ත බෆර සංරචක, Mg ඇතුළුව අවශ්‍ය සියලුම සංරචක අඩංගු වේ.2+, dUTP, සහ dNTPs.
විස්තර
ForeDirect RT-qPCR කට්ටලය නිර්මාණය කර ඇත්තේ RNA පිරිසිදු කිරීමේ ක්‍රියාවලීන් නොමැතිව ස්පුබ් එකතු කිරීම් වලින් RNA සෘජු තත්‍ය කාලීන විස්තාරණය සඳහා ය.මෙම කට්ටලය පැයක් ඇතුළත qRT-PCR චක්‍ර සම්පූර්ණ කරයි.එන්සයිම මිශ්රණය යනු Reverse Transcriptase, Hot-Start Taq DNA පොලිමරේස්, RNase inhibitor වල ප්‍රශස්ත මිශ්‍රණයකි.ප්රතික්රියා බෆරයේ ප්‍රශස්ත බෆර සංරචක, Mg ඇතුළුව අවශ්‍ය සියලුම සංරචක අඩංගු වේ.2+, dUTP, සහ dNTPs.
පිරිවිතර
100T
කට්ටල සංරචක
| න්යෂ්ටික අම්ල මුදා හැරීමේ නියෝජිතයා |
| RNA ආරක්ෂකය |
| 2× RT-qPCR බෆරය |
| එන්සයිම මිශ්රණය(Taq&M-MLV) |
| උපදෙස් |
PCR යෙදුම
1. PCR ප්රතික්රියා නල කෙටියෙන් කේන්ද්‍රාපසාරී කළ පසු, ඒවා විස්තාරණ උපකරණයේ නියැදි ටැංකියේ තබන්න.
2. තාප ප්රොටෝකෝලය
| පියවර | උෂ්ණත්වය | කාලය | සයිකල් | |
| 1 | ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම | 50℃ | විනාඩි 15 | 1 |
| 2 | පූර්ව නිරෝධනය | 95℃ | විනාඩි 1 | 1 |
| 3 | Denaturation | 95℃ | තත්පර 10 යි | 42 |
| 4 | Anneal/Extension | 60℃ | තත්පර 30 යි | |
සටහන:එක් එක් චක්රයේ දිගු කිරීමේ පියවරෙන් පසු වහාම ප්රතිදීප්ත සංඥාව අනාවරණය විය.
3. සැකසීමෙන් පසු, ගොනුව සුරකින්න සහ ප්රතික්රියා වැඩසටහන ක්රියාත්මක කරන්න.
මෙහෙයුම් පියවර
ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීමට පෙර, කට්ටලයේ ඇති සියලුම ප්රතික්රියාකාරක කාමර උෂ්ණත්වයේ දී දිය වී මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කළ යුතුය.
ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීම
1. න්යෂ්ටික අම්ල මුදා හැරීමේ මිශ්රණය සකස් කරන්න
| සංරචකය | නියැදියකට හෝ පාලනයකට පරිමාව |
| න්යෂ්ටික අම්ල මුදා හැරීමේ නියෝජිතයා | 5μL |
| RNA ආරක්ෂකය | 0.5 μL |
2. ප්රතික්රියා මිශ්රණය සකස් කරන්න
| සංරචකය | නියැදියකට හෝ පාලනයකට පරිමාව |
| 2× RT-qPCR බෆරය | 15 μL |
| එන්සයිම මිශ්රණය(Taq&M-MLV) | 1.5 μL |
| ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රොබ්ස් | 1μL |
ගබඩා කිරීම සහ කල් තබා ගැනීම
කට්ටලය -20 හි ගබඩා කළ යුතුය± 5℃.වලංගු කාලය මාස 12 කි.
නැවත නැවත කැටි-දියවන චක්‍රවලින් වළකින්න (චක්‍ර <5).
